[发明专利]一种生物炭基固定化微生物菌剂及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种生物炭基固定化微生物菌剂，其特征在于，包括生物炭基材料，以及生物炭基材料上吸附的菌体和营养剂，所述菌体为分支杆菌CSC-6(Mycobacterium sp.CSC-6)，分支杆菌CSC-6在2017年11月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学，其保藏编号是：CCTCC No.M 2017726；

营养剂溶液包括以下含量比例的组分：

油酸0.4-0.8mL，甘油1.0-3.0g，柠檬酸钠0.2-0.4g，磷酸氢二钠1.0-1.5g，磷酸二氢钾1.0-1.5g，硫酸铵0.5-1.0g，硫酸锌0.5-1.0mg，氯化钙0.5-1.0mg，硫酸铜0.5-1.0mg，硫酸镁15-25.0mg；

所述生物炭基材料包括生物炭。

2.一种如权利要求1所述生物炭基固定化微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

挑取分支杆菌CSC-6活化，取活化后的菌液扩大培养得到种子液，将种子液发酵培养后，脱水得到浓缩菌液；

将浓缩菌液加入含有生物炭基材料的液体培养基，混合吸附后，脱水去除多余的培养基初步得到生物炭基菌剂，

将该生物炭基菌剂加入营养剂吸附，制得最终所述生物炭基固定化微生物菌剂。

3.根据权利要求2所述生物炭基固定化微生物菌剂的制备方法，其特征在于，每100g生物炭基材料使用的浓缩菌液是1g，使用的营养剂溶液是50g。

4.根据权利要求2所述生物炭基固定化微生物菌剂的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

(一)使用接种环从保存分支杆菌CSC-6(Mycobacterium sp.CSC-6)的LB固体平板上，挑取一环菌株接种于5-10mL的1#液体培养基中，在20-35℃，转速为120-150r/min的振荡培养箱中活化24-48h；

(二)按照体积比1-5％的接种量取活化后菌液接种于2#液体培养基中，在20-35℃，转速为120-150r/min的振荡培养箱中扩大培养24-48h，得到种子液；

(三)按照体积比5-10％的接种量取种子液加入到装有2#液体培养基的5.0L的发酵罐中，培养条件为：通风比0.4-0.8vvm，搅拌速度200-300r/min，温度20-35℃，pH 7.2-7.4，发酵时间24-48h，发酵结束后，在5000-8000r/min的高速离心机上离心，去除发酵液，获得1#菌剂；

(四)将1#菌剂按照体积比0.1-0.25％的量加入3#液体培养基中，在20-35℃，转速为120-150r/min的振荡培养箱中培养2-8h后，加入10-50％的生物炭载体，继续振荡12-24h后，使用碟式离心机去除多余3#液体培养基获得2#菌剂；

(五)加入50-100％的营养剂溶液于2#菌剂中，吸附2-4h后，置于冷冻干燥机内或自然风干去除多余水分，得到3#菌剂，即所述生物炭基固定化微生物菌剂；

1#液体培养基的组成为：蛋白胨8.0-12.0g，酵母粉4.0-6.0g，氯化钠8.0-12.0g，去离子水1000mL，pH 7.2-7.4；

2#液体培养基的组成为：葡萄糖15.0-20.0g，蛋白胨15.0-20.0g，酵母粉8.0-10.0g，原油0-2.0g，去离子水1000mL，pH 7.2-7.4；

3#液体培养基的组成为：蔗糖4.0-6.0g，牛肉膏2.0-4.0g，酵母粉0.5-1.0g，去离子水1000mL，原油0-2.0g，pH 7.2-7.4；

所述营养剂溶液的组成为：油酸0.4-0.8mL，甘油1.0-3.0g，柠檬酸钠0.2-0.4g，磷酸氢二钠1.0-1.5g，磷酸二氢钾1.0-1.5g，硫酸铵0.5-1.0g，硫酸锌0.5-1.0mg，氯化钙0.5-1.0mg，硫酸铜0.5-1.0mg，硫酸镁15-25.0mg。

5.权利要求1所述生物炭基固定化微生物菌剂的应用，其特征在于，所述生物炭基固定化微生物菌剂用于降解石油。