[发明专利]一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变的方法

说明书

本发明公开一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变的方法，包括如下步骤：(1)烟用香料样品提取回流；(2)烟用香料样品浓缩；(3)将步骤(2)浓缩后的待测样品利用LC‑MS进行分析。本发明自制一种带有固相萃取功能的索氏提取装置，该装置可在密闭条件下对样品进行分离提纯、浓缩，本发明无需像传统的分离提纯、浓缩需要多次转移、浓缩的操作步骤，大大提高了提取效率。

技术领域

本发明属于烟用香料化学分析技术领域，特别涉及一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变的方法。

背景技术

香精香料是一种重要的添加剂,与食品安全休戚相关，因此对香精香料进行霉变监控与预防具有重要的现实意义。麦角甾醇和麦角甾酮是真菌细胞膜中的主要甾体类化合物，主要存在于绝大多数的真菌细胞膜中，维系着真菌细胞的正常代谢，据报道麦角甾醇的量与真菌的生物量存在着相关关系(麦角甾醇可作为评价粮食质量安全的敏感指标之一)；因其在大部分植物中不含有或含量很小，其良好的特异性和稳定性使其可作为霉菌污染的标记物，作为质量安全指标在世界范围内得到了广泛的研究与应用。因此可以通过监控香精香料中麦角甾醇和麦角甾酮的含量，从而了解香精香料原料以及相关产品是否存在霉变的情况或者是否存在使用了霉变原料从而导致霉变污染的情况。

目前.对麦角甾酮与麦角甾醇的定性与定量分析研究已经很多，主要报道的方法有毛细管电泳法，高效液相色谱法(HPLC)、LC-MS法和GC-MS法等。由于香精香料基质复杂，有些样品具有高水分高糖分的特点，单纯利用液相色谱紫外检测存在着色谱峰复杂，基质干扰大等定性困难的问题，而利用GC方法存在着前处理复杂的问题，LC/MS-MS在定性和定量方面都具有其优点。

由于香精香料霉变不仅会给生产产品的质量安全带来致命的影响，还会给生产企业带来极大的经济损失，风险成本较大；因此亟待寻找一种可以有效判定香精香料是否霉变或者是否霉变污染的有效判别手段；同时鉴于香精香料的基质特点，以及麦角甾醇和麦角甾酮含量较低的现状，利用稳定、可靠性高的前处理方法是对样品检测准确性和可应用性的有效保障。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变的方法，其有效解决了提取烟用香料中香气成分时干扰大，香气成分回收率低的问题，并且无需多次提取、转移、浓缩等过程，整个样品前处理过程高效简便，保障了检测结果的准确性和精密度。

除非另有说明，本发明所采用的百分数均为重量百分数。

本发明第一方面涉及一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置检测烟用香料霉变的方法，包括如下步骤：

(1)烟用香料样品提取回流：在固相萃取柱9中先后加入硅胶颗粒，称取 1～10g烟用香料样品于样品筒8中，将样品筒8与固相萃取柱9密封连接，将色谱进样瓶与圆底烧瓶1的螺纹接口2密封连接，并在圆底烧瓶1中加入50～ 100mL的溶剂并加入浓度为50μg/mL的内标工作液200μL(50μg/mL的胆甾烷醇酮-6-酮溶液)；将固相萃取柱9通过溶剂回流管6与第二接口4密封连接，将隔热导气管5与第一接口3密封连接，将三通转接管7的三个接口分别与样品筒8、密封冷凝管10和隔热导气管5密封连接，密封冷凝管10接通冷凝水，最后将烧瓶置于水浴锅中，60～80℃加热，冷凝回流0.25～4h；

(2)烟用香料样品浓缩：待步骤(1)样品回流提取完毕后，切换三通阀 13，使其与外界空气导通，不断挥发的溶剂通过三通阀13流出并回收，烧瓶1 中的溶液不断被浓缩至溶剂挥发完毕；

(3)将步骤(2)浓缩后的待测样品利用LC-MS进行分析。

本发明优选的实施方案中，步骤(1)加入烧瓶1中的溶剂为乙酸甲酯或二氯甲烷。

本发明优选的实施方案中，步骤(1)还包括在硅胶颗粒上面覆盖无水硫酸钠。

本发明优选的实施方案中，步骤(3)的分析条件为：