[发明专利]一种利用3D类器官评价药物肠毒性的检测方法

权利要求书

1.一种通过3D类器官检测药物的肠毒性的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：

(1)3D类器官的培养；

(2)3D类器官培养至出芽且形成绒毛状结构后给药；

(3)给药48小时后对3D类器官进行荧光拍照，根据3D类器官的形态破坏的程度和数量来确定药物的肠毒性。

2.一种通过3D类器官检测药物IC₅₀的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：

(1)3D类器官的培养；

(2)3D类器官培养至出芽且形成绒毛状结构后给药；

(3)给药48小时后MTS法检测药物IC₅₀。

3.一种通过3D类器官检测蛋白水平的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：

(1)3D类器官的培养；

(2)3D类器官培养至出芽且形成绒毛状结构后给药；

(3)给药48小时后检测蛋白水平。

4.如权利要求1-3之任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，采用完全培养基对3D类器官进行培养，所述完全培养基含基础培养基和生长因子。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述基础培养基含有以下体积百分比的组分：1％-3％B27、1％-3％N2、0.2％-0.5％N-乙酰、1％-3％谷氨酰胺、1％-3％HEPES、1％-3％双抗、90％-95％Advanced DMEM/F12；所述生长因子包括Responding，m-noggin、m-EGF中的一种或多种。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，在给药48小时后包括向3D类器官的培养基中加入MTS试剂，并在细胞培养箱中避光孵育的步骤。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述培养基中加入MTS试剂的终浓度为1.90mg/ml；和/或，所述细胞培养箱的温度为36℃-37℃；和/或，所述避光孵育的时间为1-2小时。

8.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)给药48小时后还包括：加入PBS、打碎基质胶、收集、静置、离心、加入裂解液步骤。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述静置具体指将收集到的孔中溶液及基质胶碎片置于冰上静置10分钟；和/或，所述离心的条件为：室温下800rpm离心5min；和/或，所述裂解液为RIPA裂解液、NP-40、TritonX-100。

10.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述蛋白指原型caspase-3和剪切caspase-3。