[发明专利]抑制菌体自溶的地衣芽孢杆菌工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.抑制菌体自溶的地衣芽孢杆菌工程菌的应用，其特征在于，应用于淀粉酶及其制剂的生产；

所述抑制菌体自溶的地衣芽孢杆菌工程菌采用敲除pcf基因获得，所述pcf基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述敲除pcf基因的方法为同源重组单交换方法；所述抑制菌体自溶的地衣芽孢杆菌工程菌的培养基为添加质量百分比为0.1%葡萄糖、体积百分比为2.5%甘油的LB培养基；

所述地衣芽孢杆菌工程菌为地衣芽孢杆菌(B. licheniformis) DL-1购自美国模式菌种收集中心(ATCC)菌种编号27811。

2.根据权利要求1所述的抑制菌体自溶的地衣芽孢杆菌工程菌的应用，其特征在于，所述抑制菌体自溶的地衣芽孢杆菌工程菌的构建方法包括：

步骤1：提取地衣芽孢杆菌（B. licheniformis）DL-1基因组DNA，以DNA为模板，设计上下游引物pcfF和pcfR，进行PCR扩增，获得pcf基因片段，pcf基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

步骤2：提取pHT01质粒DNA，以该DNA为模板，设计上下游引物CmrF和CmrR，进行PCR扩增，获得氯霉素抗性Cmr基因片段，Cmr基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

步骤3：将步骤1制备得到的pcf基因片段与步骤2制备得到的Cmr基因片段，采用重叠延伸PCR进行融合，获得同源重组pcf-Cmr片段；

步骤4：将步骤3获得的同源重组pcf-Cmr片段，酶切，浓缩后，电转化至地衣芽孢杆菌感受态细胞；

步骤5：将步骤4获得的感受态细胞，复苏后，涂布含氯霉素的琼脂固体培养基上，筛选具有氯霉素抗性的阳性重组菌，制得具有抑制菌体自溶的地衣芽孢杆菌工程菌。