[发明专利]一种温敏多肽及其编码基因以及其制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种温敏多肽，包括多个短肽重复单元，每个所述短肽重复单元的序列如SEQ ID NO:1所示；还涉及该温敏多肽的编码基因；还涉及带有该温敏多肽编码基因作为纯化标签的蛋白表达载体；还涉及该蛋白表达载体的制备方法；还涉及一种蛋白纯化方法。本发明合成的温敏多肽具有可逆相变特性，可通过可逆相变循环过程实现多肽分子的分离纯化。以温敏多肽作为标签赋予融合蛋白表现出可逆相变性质，开发简单快捷、纯化成本低、回收效率高、适用范围广的蛋白质分离纯化方法。

技术领域

本发明涉及蛋白分离与纯化领域，更特别地，涉及一种温敏多肽及其编码基因，其制备方法及应用。

背景技术

在蛋白质的分离纯化过程中，虽然色谱柱层析是最常用的分离技术，但是该技术费时耗力，需要特殊的分离设备和试剂，生产成本较高。

为了简化分离操作步骤，人们开始探索不同的分离方法。研究人员发现有些短肽对温度敏感，并随着环境温度的变化而发生可逆相变过程。一定浓度下，低温时为可溶态；当环境温度升高时，无规则卷曲伸展的结构逐渐形成β螺旋，进而通过疏水相互作用发生聚集，成为微粒、纳米粒或胶束。随着温度降低，又恢复至溶液态。在低盐和高盐离子浓度下，可会发生相应的可逆相变过程。

但是，目前尚无可用于蛋白分离纯化的温敏多肽标签。其主要原因有几点。第一，难以获得相变临界温度适用于蛋白分离纯化标签的温敏多肽；第二，温敏多肽一般为多个重复单元构成，其不好合成。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供了一种温敏多肽，包括多个短肽重复单元，每个所述短肽重复单元的序列如SEQ ID NO:1所示。

在一个优选实施方案中，所述温敏多肽包括50个所述短肽重复单元。

本发明还提供了一种温敏多肽编码基因，包括多个寡核苷酸重复单元，每个所述寡核苷酸重复单元的序列编码SEQ ID NO:1所示的短肽。

在一个优选实施方案中，所述温敏多肽编码基因包括50个所述寡核苷酸重复单元。

本发明还提供了一种蛋白表达载体，其带有上述温敏多肽编码基因作为纯化标签。

本发明还提供了一种带有温敏多肽标签蛋白表达载体的制备方法，包括以下步骤：

S1：合成所述寡核苷酸重复单元；

S2：将所述寡核苷酸重复单元克隆到表达载体上；

S3：在搭载有所述寡核苷酸重复单元的旁边继续插入方向相同所述寡核苷酸重复单元，直至达到期望个数的所述寡核苷酸重复单元。

在一个优选实施方案中，所述蛋白表达载体为pET 28a。

在一个优选实施方案中，S1中，合成5个所述寡核苷酸重复单元串联而成的串联单元；

S2中，将所述串联单元顺着T7启动子的方向插入至Xba I-BamH I位点，在插入时所述串联单元的两边引入了BseR I和Acu I位点，

并且S3包括以下步骤：

S31：依次向所述BseR I位点插入方向相同的4个所述串联单元，得到搭载有25个所述寡核苷酸重复单元的载体；

S32：将两个所述载有25个所述寡核苷酸重复单元的载体，分别用Acu I/Bgl I和BseR I/Bgl I双酶切，分别得到带有寡核苷酸重复单元的片段A和片段B；

S33：将所述片段A和B用T4 DNA连接酶酶连接，得到所述带有温敏多肽标签蛋白表达载体。

本发明还提供了上述温敏多肽在蛋白纯化中的应用。

本发明还提供了一种蛋白纯化方法，包括以下步骤：