[发明专利]一种G-17单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种G‑17单克隆抗体，为IgG型，由单克隆细胞株S100和S200制备获得，细胞株S100保藏于中国典型微生物保藏中心，保藏日期2019年1月15日，保藏编号CCTCC M 2019010；细胞株S200保藏于中国典型微生物保藏中心，保藏日期2019年1月15日，保藏编号CCTCC M 2019020。单克隆抗体包括GC‑1和GN‑1，利用抗体GN‑1作为包被抗体，GC‑1作为标记抗体，建立DAS‑ELISA方法，检测天然血清中的G‑17含量。本发明的有益效果在于：本单克隆抗体能够特异性的结合G‑17，且识别能力和效率较高。本单克隆抗体能够有效应用于药物制备中，增加了药物的靶向性和特异性。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种G-17单克隆抗体及其应用。

背景技术

胃泌素是一种重要的胃肠道肽类激素，于1905年由英国学者Edkins首先发现并命名。胃泌素由位于胃窦及十二指肠近端黏膜的G细胞合成及分泌。其合成经历了由胃泌素原、甘氨酸延伸型胃泌素到成熟胃泌素的阶段，前两种胃泌素合成的中间产物是未酰胺化的胃泌素，而成熟胃泌素是酰胺化的胃泌素，人体中95％以上的活性胃泌素为α-酰胺胃泌素。酰胺化胃泌素包括G17、G34、G14、G6、G52、G71，其中G17是胃窦中胃泌素的主要形式，为进餐后血液中胃泌素的主要形式，G34是十二指肠中胃泌素的主要形式,是介于两餐之间胃泌素的主要形式。胃泌素与胃泌素受体结合后通过一系列信号转导而发挥生物学效应。胃泌素与胆囊收缩素具有相同的羧基末端五肽序列,因此其受体与胆囊收缩素受体(cholecystokinin receptor， CCKR)完全相同，故胃泌素受体也称CCKR。CCKR主要有CCK-A受体和CCK-B受体两种，胃泌素主要通过与CCK-B受体结合发挥生物学效应。

在慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)中，血清G17与胃黏膜萎缩部位及萎缩程度具有相关性。Cao等在一项病例对照研究中发现胃窦萎缩组的血清G17比对照组低，胃体萎缩组的血清G17比对照组高，多灶性萎缩组的血清G17比对照组低，但高于胃窦组。分析其原因可能为胃窦萎缩时，G细胞数量较少，G17合成降低；胃体萎缩时，泌酸细胞数量减少，胃内处于低酸状态，由胃泌素胃酸轴负反馈导致胃泌素升高。范玉林等研究将胃黏膜轻、中和重度萎缩组分别与正常对照组比较，血清G17 含量在胃黏膜轻度萎缩时显著增高，中度萎缩时无显著差异，重度萎缩时显著降低；与正常对照组比较,G细胞数量在胃黏膜轻度萎缩时无显著差异。而在胃黏膜中、重度萎缩时则显著降低。

陈莫耶等研究发现在所有患者中，与非萎缩性胃炎组相比，胃溃疡组血清G17水平显著升高(P<0.05)。张忠等通过对3906份血清样品的G17水平检测发现，由正常者经浅表性胃炎至胃糜烂或溃疡，血清G17水平进行性升高。血清G17水平升高可能与胃黏膜存在炎症反应以及胃糜烂溃疡患者多伴有H.pylori感染相关。

胃癌患者血清G17的水平与病变部位、临床分期、病理组织分型相关。在164例胃癌患者中，分为胃窦癌组，胃体癌组，胃底、贲门癌组，检测血清总胃泌素水平，结果表明，胃底、贲门癌的血清胃泌素水平远高于胃体癌、胃窦癌及正常对照组，且随着胃癌临床分期越来越高；胃体癌血清胃泌素水平组高于对照组，胃窦癌组则低于对照组，但两者差异无统计学意义。胃底、贲门癌和胃体癌血清G17明显升高，可能是由于癌组织大量破坏泌酸腺体和迷走神经末梢，使胃酸分泌缺失，血清胃泌素水平反馈性升高。Konturek等测定72例胃癌组和77对照组的血清胃泌素，结果发现, 胃癌组血清胃泌素高于对照组，肠型胃癌组的高胃泌素血症患者明显多于弥散型、混合型胃癌组，研究证实胃癌的发生发展中有胃泌素参与，其对癌细胞的生长及恶性转化有一定的意义。胃泌素与上消化道黏膜中的CCK-2 受体具有高度亲和力，结合后能够激活细胞增殖、抗凋亡、炎症反应等多种信号通路，诱导酸分泌以及促进肿瘤发生。Morton等建立高胃泌素动物模型，发现其胃黏膜细胞发生恶性转化。Takaishi等在研究胃癌与H.pylori 及胃泌素的关系时，提出H.pylori感染是胃癌的启动因素，而胃泌素是促进胃癌发展的重要因子。