[发明专利]一种DcR3的定量检测试剂盒

说明书

本发明属于生物医药领域，公开了一种DcR3的定量检测试剂盒。与现有DcR3ELISA检测试剂盒相比，本发明所述的DcR3的定量检测试剂盒具有检测灵敏度高、检测限低的优势，可直接用于人血清中DcR3的含量检测，从而可直接用于肿瘤的筛查、预后判断和治疗指导。此外，本发明中所使用的抗体均为单克隆抗体，与使用多克隆抗体的试剂盒相比，各批次样品间具有很高的品质均一性。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体公开了一种DcR3的定量检测试剂盒。

背景技术

死亡诱骗受体3(Decoy receptor 3，DcR3)属于肿瘤坏死因子受体超家族成员，是一种可溶性受体，能够与肿瘤坏死因子家族成员(如：Fas配体、TL1A、LIGHT等)竞争性结合，从而导致机体对肿瘤细胞和活化的自身免疫细胞的耐受。研究发现DcR3在肿瘤患者血清及组织中浓度的高低与其恶性度呈正相关，检测术后患者血清中DcR3水平可作为肿瘤切除彻底与否的重要指标(刘瑞振，张长弓et al.2009)。此外，DcR3与肿瘤转移密切相关，是诊断癌症转移的理想肿瘤标志物(Li,Xie et al.2017)。因此，开发基于检测DcR3肿瘤标志物的ELISA诊断试剂盒，有助于癌症的筛查、预后判断和治疗指导。

检测DcR3含量的ELISA试剂盒一般采用双抗体夹心法，其基本原理为将一定量的包被抗体以物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入无关蛋白载体封闭未结合位点，然后加入待检标本，通过加入检测抗体，酶标记第二抗体后用底物显色，微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈正相关。

目前市场上有几个人DcR3ELISA检测试剂盒产品在售，包括：RD Systems公司、Invitrogen公司、Abcam公司、Boster公司等。但是这些市场上售的DcR3ELISA检测试剂盒的灵敏度不够高，检测限不够低。并且有的公司ELISA试剂盒所使用的抗体为多克隆抗体，不能够保证各批次样品间具有很高的品质均一性。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于针对现有技术灵敏度低、检测线高的问题，，提供一种DcR3的定量检测试剂盒。

一种DcR3的定量检测试剂盒，包括DcR3单克隆抗体、生物素标记的二抗、链酶亲和素-过氧化物酶。

本发明所述试剂盒中，所述亲和素作为“桥”与生物素化的抗体和生物素结合的酶连接起来，即形成亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC复合物)，检测时待测样品中的抗原先后与一抗、生物素化二抗、ABC复合物结合，最终形成晶格样结构的复合物，使抗原与抗体反应信号放大，以增加灵敏度。

作为优选，所述DcR3单克隆抗体为鼠源的DcR3单克隆抗体、兔源的DcR3单克隆抗体或羊源的DcR3单克隆抗体。

作为优选，所述DcR3单克隆抗体为单克隆杂交瘤细胞7A51H2或IB7产生的单克隆抗体。

作为优选，所述DcR3单克隆抗体经磷酸盐缓冲液(PBS)稀释成工作浓度4μg/ml。

作为优选，所述生物素标记的二抗为生物素标记的鼠抗人DcR3单克隆抗体。

进一步的，本发明所述DcR3的定量检测试剂盒，还包括显色液TMB、PBS、1M H₂SO₄、脱脂奶粉、含0.05％Tween-20的PBS。。

本发明还提供了一种DcR3的定量检测方法，包括如下步骤：

(1)以DcR3单克隆抗体作为一抗包被酶标板，洗涤后封闭液封闭；

(2)洗涤后加入待测样品，室温孵育2h；

(3)洗涤后加入生物素标记的二抗，室温孵育2h；

(4)洗涤后加入链酶亲和素-过氧化物酶，避光孵育20min；