[发明专利]一种与KEAP1结合并调节NRF2蛋白稳定性的蛋白多肽

说明书

本发明涉及生物医学领域，具体是一种与KEAP1结合并调节NRF2蛋白稳定性的蛋白多肽。氧化应激调控在肿瘤发生发展过程中具有重要作用，NRF2作为细胞抗氧化关键分子，影响NRF2表达和蛋白稳定性的因素对于调节细胞氧化应激耐受能力以及化疗药物抵抗性都具有重要作用。本发明在RMP(RNA polymerase II subunit 5‑mediating protein)基础上提出一种竞争性结合KEAP1的蛋白多肽，它通过增强NRF2蛋白稳定性，提高细胞抗氧化能力。本发明对调控细胞抗氧化能力，提供了有用的靶向目标。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体地说，是一种与KEAP1结合并调节NRF2蛋白稳定性的蛋白多肽，蛋白多肽竞争性结合KEAP1，使细胞抗氧化调控关键蛋白NRF2泛素化降解减少，从而增强肿瘤抗氧化能力。

背景技术

RMP(RNA polymerase II subunit 5-mediating protein，RMP亦被称作URI，Unconventional prefoldin RPB5 Interactor)最早是在1998年由日本研究者寻找HBx转录调节相关蛋白过程中发现：RNA聚合酶Ⅱ第五亚基(RNA polymerase II subunit 5，RPB5)与HBx直接结合，同时两者通过各自的结合位点与TFⅡB结合，此三者形成的复合体促进HBx的转录；而他们发现RMP在HBx含量较低情况下，竞争性结合RBP5，覆盖后者蛋白结构中与HBx和TFⅡB结合位点，从而抑制HBx的转录。2011年，瑞士科学家报道URI作为癌基因在卵巢癌中发挥促肿瘤作用：URI与PP1γ结合形成复合体并抑制其磷酸酶活性，从而破坏了后者与S6K1-BAD组成的负反馈通路，BAD磷酸化增加，细胞凋亡减少，存活增加(J.P.Theurillat，S.C.Metzler，N.Henzi，et al.URI is an oncogene amplified inovarian cancer cells and is required for their survival[J].Cancer Cell,2011,19(3):317-32.)。随后，更多的研究发现RMP在前列腺癌、多发性骨髓瘤、子宫内膜癌等各类恶性肿瘤中发挥促肿瘤作用。此外，也有报道发现RMP能易化p65与IL-6启动子区结合，促进其转录，使肝癌细胞分泌更多IL-6，通过IL-6/STAT3信号通路，促进肝癌转移和自我更新。

ROS(reactive oxygen species)对于肿瘤发生发展具有重要作用。细胞内过多ROS造成关键基因突变促进细胞增殖和肿瘤发生。肿瘤在生长过程中，需要应对各种内外环境因素变化。其中ROS大量产生和释放，会引起细胞内氧化还原平衡状态打破，导致一系列诸如DNA损伤、细胞膜结构破坏、细胞器破坏等现象，最终导致细胞凋亡的发生。因此，探索肿瘤发生发展过程中细胞抗氧化调控机制，具有非常重要的意义。

KEAP1-NRF2-ARE信号通路是在细胞抗氧化过程中起重要作用。KEAP1(Kelch-likeECH-associated protein 1)在细胞质中与肌动蛋白锚定，同时能够通过Kelch区域与NRF2结合。KEAP1为E3泛素连接酶CUL3提供支架，而后者能够通过泛素-蛋白酶体介导NRF2降解。正常情况下，通过上述机制，NRF2仅维持较低水平，以保证日常生命活动。氧化应激时，上游相关刺激介导NRF2降解终止并蓄积，最终进入细胞核。入核的NRF2与抗氧化反应元件(antioxidant response element(ARE))结合，促进抗氧化相关基因的转录，参与细胞抗氧化相关的各项生理活动中。(John P.Fruehauf，Frank L.Meyskens,Jr.Reactive oxygenspecies:A breath of life or death？[J].Clinical Cancer Research,2007,13(3):789-794.)

针对性的干预抗氧化相关通路中重要分子，对于肿瘤发生和发展均具有重要作用，亦对于肿瘤治疗提供个性化药物指导。

发明内容