[发明专利]一种赤红球菌发酵方法及其作为佐剂在动物疫苗中的应用

权利要求书

1.一种赤红球菌，其特征在于，所述赤红球菌为在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的保藏编号为CGMCC NO.17012的赤红球菌Rhodococcus ruber。

2.权利要求1所述的赤红球菌的发酵方法，其特征在于，具体按照以下步骤进行：

1）洗脱菌种制备：将所述赤红球菌接种于固体琼脂培养基方瓶内，于28℃-35℃透气或好氧培养4-6天，待方瓶中菌体呈现浅黄或橙黄或浅红或深红色后，用适量生理盐水无菌洗脱，收获菌体，作为洗脱菌种备用；

2）一级种子液制备：取步骤1）制备的洗脱菌种液，按液体培养基体积1%-5%接种摇瓶培养，经恒温摇床连续振荡培养，转速100rpm-300 rpm，28℃-35℃透气或好氧培养18h-48h，作为一级种子液备用；

3）二级种子液制备：取步骤2）制备的一级种子液，按液体培养基体积5%-15%接种于发酵罐，转速100rpm-300rpm，28℃-35℃通气发酵18h-48h，作为二级种子液备用；

4）终点发酵：取步骤3）制备的二级种子液，按终点液体发酵培养基体积5%-15%接种于发酵罐，转速100rpm-300rpm，28℃-35℃通气发酵18h-48h，作为终点发酵液；其中，所述步骤4）中终点液体发酵培养基的组分及重量百分比为：胰蛋白胨1%，大豆蛋白胨0.5%，尿素0.05%，酵母浸出粉0.5%，NaCl 0.5%，谷氨酸钠0.5%，柠檬酸-柠檬酸盐0.25%，甘露醇5%，余量为水。

3.根据权利要求2所述的赤红球菌的发酵方法，其特征在于，所述步骤1）中固体琼脂培养基所含营养物质的重量百分比是：胰蛋白胨0.1%-2%，大豆蛋白胨0.1%-1%，酵母浸出粉0.1%-1%，NaCl 0.1%-1%，谷氨酸钠0.1%-1%，柠檬酸-柠檬酸盐0.1%-0.5%，葡萄糖或蔗糖或乳糖或果糖或甘露醇或甘油1%-5%，琼脂粉1%-2%；步骤2）和步骤3）液体培养基组分及重量百分比均为：胰蛋白胨0.1%-2%，大豆蛋白胨0.1%-1%，酵母浸出粉0.1%-1%，NaCl 0.1%-1%，谷氨酸钠0.1%-1%，柠檬酸-柠檬酸盐0.1%-0.5%，葡萄糖或蔗糖或乳糖或果糖或甘露醇或甘油1%-5%，余量为水。

4.权利要求1所述的赤红球菌作为佐剂原料在制备动物疫苗中的用途，其特征在于，佐剂原料的制备方法为：所述赤红球菌按照权利要求2-3任一项所述发酵方法发酵后的产物经灭活处理后，通过连续流离心机离心分离菌体沉淀物，经过纯化水洗涤，再次离心分离，收获菌体沉淀物，菌体沉淀物直接作为佐剂原料。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，疫苗终产品中佐剂活性物干物质含量为1μg/mL-100mg/mL；所述疫苗为灭活疫苗。

6.权利要求1所述的赤红球菌在制备禽用疫苗或猪用疫苗中的用途。

7.权利要求1所述的赤红球菌在制备新城疫灭活疫苗或禽流感灭活疫苗中的用途。

8.权利要求1所述的赤红球菌在制备猪瘟活疫苗中的用途。

9.一种专用于发酵培养权利要求1所述赤红球菌的液体培养基在制备禽用疫苗和猪用疫苗中的用途，其特征在于，该液体发酵培养基的组分及重量比为：胰蛋白胨1%，大豆蛋白胨0.5%，尿素0.05%，酵母浸出粉0.5%，NaCl0.5%，谷氨酸钠0.5%，柠檬酸-柠檬酸盐0.25%，甘露醇5%，余量为水。

10.一种专用于发酵培养权利要求1所述赤红球菌的液体培养基在制备鸡新城疫、H9亚型禽流感二联灭活疫苗中的用途，其特征在于，该液体发酵培养基的组分及重量比为：胰蛋白胨1%，大豆蛋白胨0.5%，尿素0.05%，酵母浸出粉0.5%，NaCl 0.5%，谷氨酸钠0.5%，柠檬酸-柠檬酸盐0.25%，甘露醇5%，余量为水。