[发明专利]黄芪甲苷人工抗原及其人工抗体的制备方法和应用

权利要求书

1.一种黄芪甲苷人工抗原，其特征在于，将黄芪甲苷分子中葡萄糖基上C6”-CH₂OH选择性氧化成C6”-COOH从而制备出黄芪甲苷半抗原，然后通过黄芪甲苷半抗原分子中的-COOH与载体蛋白分子中的-NH₂缩合而成完全抗原，其结构式为：

2.根据权利要求1所述的一种黄芪甲苷人工抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取一定量的黄芪甲苷，加入到0.1～10倍质量的水中，再依次加入0.01～5倍质量的溴化钠、0.01～5倍质量的2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧自由基(TEMPO)和0.01～5倍质量的次氯酸钠，在0℃～20℃中反应10～600min，过滤，滤液用酸调pH至酸性，待固体析出后，浓缩，固液分离，固体用乙醇溶解、转移、浓缩至干，得黄芪甲苷半抗原；

(2)取一定量步骤(1)所得的黄芪甲苷半抗原，加入到0.1～10倍质量的二甲基甲酰胺溶液中，再依次加入0.2～2倍质量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和0.2～2倍质量的N-羟基琥珀酰亚胺，室温避光搅拌1～4h后，将反应混合物5000rpm离心5min；

(3)在冰浴搅拌的状态下，将上述步骤(2)离心得到的上清液逐滴加入到5～20倍质量的载体蛋白溶液中，于4℃搅拌反应8～16h后，将反应混合物离心后装入透析袋，用PBS冰浴透析4～5天，即得黄芪甲苷人工抗原。

3.根据权利要求2所述的一种黄芪甲苷人工抗原的制备方法，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白(BSA)。

4.根据权利要求1所述的一种黄芪甲苷人工抗原制备的黄芪甲苷人工抗体，其特征在于，用权利要求1所述的黄芪甲苷人工抗原去免疫动物，发生特异性免疫反应后所得的抗体。

5.根据权利要求4所述的一种黄芪甲苷人工抗原制备的黄芪甲苷人工抗体，其特征在于，所述黄芪甲苷人工抗体是多克隆抗体。

6.根据权利要求5所述的一种黄芪甲苷人工抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将权利要求1中制备好的黄芪甲苷人工抗原作为免疫原，与弗氏完全佐剂后对动物进行注射；

(2)第一次免疫注射后，每隔2周注射一次，即加强免疫；

(3)从第四次免疫起，每次免疫后的第7-10天，采血测血清效价，达到理想效价后，再免疫一次，7-14天后取血，分离获得抗血清，即得黄芪甲苷多克隆人工抗体。

7.根据权利要求6所述的抗体的制备方法，其特征在于，所述动物为新西兰大白兔。

8.根据权利要求7所述的方法制备的黄芪甲苷多克隆人工抗体的应用，其特征在于，所述多克隆人工抗体用于黄芪甲苷、黄芪皂苷I、环黄芪醇化合物的免疫检测。