[发明专利]一种具有抑制白血病细胞增殖作用的多肽

权利要求书

1.一种具有抑制白血病细胞增殖作用的多肽，其特征在于，所述多肽由37个氨基酸组成，氨基酸序列为：

Lys-Glu-Ser-Met-Asp-Ala-Asn-Lys-Pro-Thr-Lys-Asn-Leu-Pro-Leu-Lys-Lys-Ile-Pro-Cys-Lys-Thr-Ser-Ala-Pro-Ser-Gln-Ser-Phe-Phe-Ala-Arg-Asp-Asn-Thr-Ala-Asn；

所述多肽的N端与肉豆蔻酸连接，通过肉豆蔻酸修饰进入白血病细胞。

2.一种权利要求 1所述的多肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）多肽的合成

a.将Fmoc-Asn（trt）wang Resin树脂倒入反应柱中，加入DCM浸泡，抽干；

b.加入脱保护溶液，通氮气搅拌鼓动抽干；

c.向玻璃反应柱中加入DMF，通氮气搅拌鼓动抽干；

d.将氨基酸混合溶液或保护氨基酸和HBTU加入反应柱中，再加入NMM，通氮气搅拌鼓动抽干；

e.加入DMF洗涤，氮气搅拌鼓动抽干，得到颗粒状物质；

f.取颗粒状物质于小试管中，加入Kaiser test试剂的A、B、C液各两滴，放入干式加热器中，加热，若溶液颜色微黄，颗粒状物质无色透明则为反应完全，重复上述步骤b-e ,连接下一个氨基酸，直到连完最后一个氨基酸及肉豆蔻酸；

g. 向完成步骤f) 的反应柱中，加入甲醇，氮气鼓动抽干，再加入DCM，氮气鼓动抽干，得到合成的多肽树脂，装入器皿中置于真空干燥器内真空干燥；

2）多肽的切割

向多肽树脂中，加入多肽切割液，放置于恒温环境下振荡；之后进行过滤，在滤液加入无水乙醚，搅拌后析出白色固体；向白色固体中加入无水乙醚，离心洗涤，真空干燥后得到的白色粉末，即为多肽的粗品；

3）多肽的纯化

取多肽的粗品，加入纯水和ACN超声溶解，滤膜过滤后取滤液；将滤液用高效液相色谱仪进行正向色谱柱进行梯度检测分析；制备色谱柱吸附和洗脱收集馏分；将收集的馏分进行检测，纯度合格的进行冷冻干燥，得到纯化后的多肽。

3.根据权利要求2所述的多肽的制备方法，其特征在于，所述脱保护溶液由20%的六氢吡啶和80%的DMF配置而成。

4.根据权利要求 2所述的多肽的制备方法，其特征在于，所述保护氨基酸为Fmoc-Aa-oh形式的保护氨基酸，所述氨基酸混合溶液由保护氨基酸溶于DMF制成。

5.根据权利要求 2所述的多肽的制备方法，其特征在于，所述Kaiser test试剂的A液为80%的苯酚和20%的无水乙醇，B液为重蒸吡啶，C液为5克茚三酮和100ML无水乙醇。

6.根据权利要求 2所述的多肽的制备方法，其特征在于，所述多肽切割液的组成成分为：87.5%TFA，5%苯甲硫醚，2.5%苯酚，2.5%EDT和2.5%H2O。

7.根据权利要求 2所述的多肽的制备方法，其特征在于，所述3）多肽的纯化步骤如下：

制备条件

波长：220nm

流速：1ml/min

制备柱：Gemini-NX 5μ C18 110A, 4.6*250mm

流动相：A液： 0.1%Trifluoroacetic in 100% Acetonitrile

B液:0.1%Trifluoroacetic in 100% Water

a)称量多肽的粗品于烧杯中，加入纯水和ACN超声溶解，待完全溶解后用0.45μ的滤膜过滤；

b) 取多肽的粗品于离心管中用纯水超声溶解至澄清过滤，用梯度10-100%检测分析；

c)在制备条件下，平衡仪器6分钟后停所有泵，将a)步骤过滤后的滤液用进样阀进样，先执行30-90%的梯度20min，再执行100-0%的梯度，收集馏分；

d) 将收集的馏分进行检测，纯度合格的进行冷冻干燥，得到纯化后的多肽。

8.一种权利要求1所述的多肽用于制备治疗白血病的药物。