[发明专利]用于结直肠癌早筛、诊断、疗效及预后评价的piRNA-54265检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于结直肠癌的早期筛查、诊断、疗效监测及预后评价的piRNA‑54265检测试剂盒。该试剂盒包含有piRNA‑54265检测引物组合，包括前向引物和反向引物，前向引物是将piRNA‑54265的RNA序列中的U改成T，从5端开始撷取若干碱基且包括TGGAG五个碱基。本发明原创性首次针对piRNA‑54265提供了特定的引物设计模式，据此设计的引物扩增效率及特异性俱佳。本试剂盒提供了从样本RNA纯化至含量检测的完整过程，流程优化，操作简便高效，适用的待测样本包括组织、细胞，细胞上清、血清（血浆）、尿液、唾液等体液以及其余各类RNA稀有样本，所需样本量较市面同类型试剂盒少，适用范围广。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域。更具体地，涉及一种用于人结直肠癌早筛、诊断、疗效及预后评价的piRNA-54265检测试剂盒。

背景技术

结直肠癌是世界范围内常见的胃肠道肿瘤，在我国恶性肿瘤中位居前列，结直肠癌隐匿性强，大多患者发现时已是中晚期临床治疗效果不佳，是全球范围内致人死亡的重要病因之一。而早期结直肠癌患者手术切除率高，复发转移少，五年总生存显著提高。因此，结直肠癌早期诊断尤其是早期筛查具有重要意义。目前，肠镜检查作为早期诊断的重要手段，准确率高，但由于经济成本高、操作人员及设备要求高、体检者依从性差，并不利于普及早期筛查。因此，寻找及开发出经济简便、高灵敏度特异度的生物标志物进行结直肠癌的早期筛查和诊断，意义重大。

Piwi-interacting RNA(简称piRNA)是一类长度约26-31nt的单链非编码RNA，在转座子抑制和基因表达调控方面行使重要功能。越来越多的研究发现，某些特定piRNA在胃癌、结直肠癌、肺癌、乳腺癌等肿瘤中异常表达，而扰动这些肿瘤细胞中特定的piRNA能影响诸如增殖、转移、侵袭等细胞恶性表型。因此，piRNA在肿瘤的发生发展中可能发挥重要作用。本课题组研究发现piRNA-54265在结直肠癌与癌旁组织中的表达具有显著统计学差异，piRNA-54265在癌组织中高表达。piRNA-54265在癌组织中表达量的高低与结直肠癌患者的生存预后相关，piRNA-54265高表达组结直肠癌患者预后较差。结直肠癌患者血清中能够检测到piRNA-54265，其在血清中的含量与在癌组织中的含量呈正相关性，并与患者生存预后相关；在非结直肠癌的正常人血清中，piRNA-54265含量极低，与结直肠癌患者血清piRNA-54265含量比较，差异显著并很容易区分。敲降piRNA-54265后，结直肠癌细胞的增殖及侵袭能力等均明显减弱，能够抑制裸鼠皮下移植瘤的生长及癌细胞的远处转移及定植。增加或降低piRNA-54265的表达水平，结直肠癌细胞均表现出一定程度的化疗敏感性降低或增强；piRNA-54265高表达患者，化疗近期疗效较差。而且，血清piRNA-54265能有效预测结直肠癌，可在确诊3年前患者的血液中检测到异常高表达的piRNA-54265，因此能在正常人群中进行结直肠癌的早期筛查及早期诊断，有效预测时间比临床确诊提早至少三年。

因此，以piRNA-54265作为结直肠癌早筛、诊断、预后监测靶标开发相关诊断试剂盒具有重要意义和应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种可用于结直肠癌的早期筛查、诊断、疗效监测及预后评价的piRNA-54265检测试剂盒。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

基于本课题组的研究成果，piRNA-54265在血清中稳定表达，piRNA-54265在结直肠癌患者血清中特异性高表达，并且与肿瘤分期正相关(piRNA-54265的核苷酸序列如SEQID NO.1所示)。前瞻性自然人群队列研究表明血清piRNA-54265水平可预测结直肠癌的发病，并且可比临床确诊提早3年。因此piRNA-54265可以作为结直肠癌早筛、诊断、疗效评价、预后判断的生物标志物。进一步开发了piRNA-54265的检测试剂盒，可用于结直肠癌的早期筛查、诊断、疗效监测及预后评价。