[发明专利]一种3型鸭甲肝病毒弱毒株CH-P60及其应用

说明书

本发明公开了一种3型鸭甲肝病毒弱毒株CH‑P60及其应用，该病毒株于2018年12月2日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，保藏编号为CCTCC NO：V201861。所述的3型鸭甲肝病毒弱毒株对雏鸭安全，无致病力，且可保护同源强毒的攻毒，具有实际和广泛的应用价值。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种3型鸭甲肝病毒弱毒 株CH-P60及其应用。

背景技术

鸭病毒性肝炎(Duck virus hepatitis，DVH)是由鸭肝炎病毒(Duck hepatitisvirus，DHV)感染雏鸭引起的一种急性、高度接触性传染病。 目前世界上主要养鸭地区均有本病的存在，具有间歇爆发、地方流行 性等特点，是危害养鸭业的主要疾病之一。该病主要侵害一月龄以内 的雏鸭，具有发病急，传播迅速，病程短和死亡率高等特点；临床主 要表现为雏鸭死前发生痉挛，头向背部后仰，呈“角弓反张”；病理 变化主要为剖检可见肝脏肿大发炎和大量的出血性斑点。该病主要由 属于小RNA病毒科(Picornaviridae)禽肝病毒属(Avihepatovirus)的 鸭甲肝病毒(Duck hepatitis Avirus，DHAV)引起。DHAV具有三种血清型，即DHAV-1、DHAV-2和DHAV-3。近年来，我国流行的DHAV主 要是DHAV-1和DHAV-3。

当前市场上对DHAV的防控主要是使用DHAV-1的弱毒疫苗，它 们可以有效防控DHAV-1在我国的流行，但是不能完全阻止属于不同 血清型的DHAV-3病毒的流行给养殖业造成了巨大的经济损失。因此， 研制适合我国DHAV-3流行情况的疫苗迫在眉睫。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种3型 鸭甲肝病毒弱毒株，并对其在鸭病毒性肝炎预防方面的应用进行研究。

本发明具体通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种3型鸭甲肝病毒CH-P60株DHAV-3CH-P60，该 病毒株于2018年12月2日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地 址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，保藏编号为 CCTCC NO：V201861。

本发明所述3型鸭甲肝病毒弱毒株CH-P60是由DHAV-3分离株作 为种子病毒，经过多次传代致弱获得，具体是使用9日龄健康鸭胚对 DHAV-3进行连续传代致弱，每个代次通过尿囊腔接种5枚鸭胚，每 枚鸭胚接种0.2mL，置于37℃恒温培养箱内孵育36～48小时后无菌 收集鸭胚尿囊液，然后将尿囊液使用灭菌生理盐水稀释100倍后，使 用前述方法做同样处理，将病毒连续传至第60代，获得的病毒即为 CH-P60株。

对病毒株CH-P60进行VP1基因遗传进化分析，其核苷酸序列如 SEQ ID NO：7所示，从GenBank上搜索下载已公布的37株具有代表 意义的DHAV-1、DHAV-2和DHAV-3毒株VP1基因序列，并应用MEGA 7.0软件按Clustal W法对序列进行比对，然后并按Neighbor-Joining法，选bootstrap method 1000参数，构建系统进化树进行病毒遗传进 化分析，病毒株CH-P60在遗传进化树中与流行于中国地区3型鸭甲 肝病毒属于同一分支，与流行于韩国地区的3型鸭甲肝病毒属于不同 分支。

进一步，本发明通过ELD50测定、雏鸭致病力试验、鸭胚中和实 验和雏鸭攻毒保护试验来测定弱毒株生物学特性。试验结果表明 CH-P60毒株对鸭胚适应性增强，对雏鸭不具有致死性，且免疫雏鸭 后，雏鸭的攻毒保护率升高。

在本发明的另一方面，所述的CH-P60毒株在制备预防3型鸭甲 肝病毒疫苗中的应用也在本发明的保护范围内。

在本发明的另一方面，一种预防3型鸭甲肝病毒疫苗，该疫苗有 效成分为3型鸭甲肝病毒弱毒株CH-P60。

上述所预防3型鸭甲肝病毒疫苗通过以下步骤制备：