[发明专利]一种影响猪毛囊发育的UNC5D突变基因及其应用

说明书

本发明涉及一种影响猪毛囊发育的UNC5D突变基因及其应用。本发明提供的影响猪毛囊发育的UNC5D突变基因有7个突变位点，物理位置在猪的第15号染色体的50201782到50441773之间，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1～4所示。本发明找到了猪无毛性状关键基因，通过对无毛性状的分析研究，为人类遗传性脱发疾病研究提供重要借鉴和动物模型。利用本发明的UNC5D突变基因对猪进行辅助育种，能够有效的选择出能稳定遗传的无毛性状的母猪，进而能够实现短时间、低成本、高准确性的选育品种优良的疾病模型猪，其次也可以作为鉴定导致遗传性无毛症产生的分子标记，进一步还可以应用于哺乳动物的毛发发育研究。

技术领域

本发明涉及分子生物学医学领域，具体是一种影响猪毛囊发育的UNC5D突变基因及其应用。

背景技术

人类对遗传性脱发和稀发十分关注，毛囊形态结构和功能的稳定是毛发周期正常的关键。毛囊形态结构和功能是先天性的，人们对毛囊的遗传机理做了诸多研究，期望从源头上解决脱发问题。猪在医学上具有重要意义，猪与人类遗传同源性非常高，其基因组与人的基因组相似、复杂程度和染色体组成也较为一致，且人和猪同线性区域的保守性是人与小鼠的3倍。因此，猪现在作为医学研究的理想模式动物，用来研究人类医学问题。

无毛猪具有毛囊发育不全的特征，其躯体被毛稀疏，因此，可以以无毛猪作为研究人类毛发领域疾病的动物模型。为了筛选可作医学研究动物模型的无毛猪，需要有一种简单、方便、有效的区分正常和无毛猪性状的分子标记，以实现对无毛猪的精准鉴定。毛发发育开始于胚胎时期，而通过分子标记技术可以在母猪妊娠时对母及与配公猪进进行筛选。从而确保受精妊娠后所产仔猪全部为无毛仔猪。因此需要对影响猪毛囊发育的相关蛋白和相应突变基因进行研究，目前尚无相关研究报道。

神经生长因子受体5(Unc-5 netrin receptor D，UNC5D)，UNC5D是人类依赖受体UNC5家族的第4个成员，在神经信号传导，轴突导向，锥形神经元分化，神经蛋白激活信号通路以及神经元的迁移调节方面发挥重要的作用。既往对小鼠UNC5同源物UNC5A、UNC5B和UNC5C的体外和体内研究表明，UNC5B是肿瘤抑制因子p53的直接转录靶点，介导p53诱导的细胞死亡。虽然我们之前也发现了p53直接靶向UNC5D的表达，但是，UNC5D功能的具体发挥作用尚不清楚。在本发明的前期试验中，通过筛选发现，UNC5D蛋白的一些候选基因与无毛性状以及动物的毛囊发育存在关联。

发明内容

本发明的目的在于提供一种影响猪毛囊发育的UNC5D突变基因，可应用在猪的基因分型、筛选及辅助育种中。

本发明提供的影响猪毛囊发育的UNC5D突变基因，该突变基因有7个突变位点，物理位置在猪的第15号染色体的50201782到50441773之间，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1～4所示。

本发明所述影响猪毛囊发育的UNC5D突变基因应用在猪的基因分型、筛选、鉴定及辅助育种中。

本发明通过以下技术手段实现：

步骤1：通过先期发现的无毛大白猪，对大白猪无毛个体进行扩群，构建大白猪无毛性状实验群体；

步骤2：对猪的毛囊及表皮组织切片观察并鉴定有毛无毛性状型,排除其中一些表型为无毛但是有毛囊组织的有毛猪；

步骤3：通过全基因组关联分析(GWAS)和基因组重测序从DNA水平上挖掘猪无毛性状候选基因区域，全基因组关联分析探寻无毛性状显著SNP位点，GO分析和KEGG分析查找候选基因的相关功能，基因组重测序挖掘猪无毛性状候选基因区域，通过多组学相互验证分析；

步骤4：采集无毛和有毛猪组织，通过定量PCR、HE染色和免疫组化，从RNA和蛋白水平上验证UNC5D基因在不同个体及不同时期的表达差异，验证目标突变基因的功能。

本发明的有益效果是：