[发明专利]蒸汽爆破技术辅助酸回流法提取甘草次酸

说明书

本发明涉及天然产物中微量活性成分的制备领域，具体涉及一种利用蒸汽爆破技术结合酸回流法从甘草中高效提取甘草次酸的方法。其主要工艺流程为：将甘草原料在0.5‑2.5MPa、1‑5min的蒸汽爆破条件下进行预处理，之后用改进的酸回流法提取8‑10h，香草醛‑‑高氯酸比色法测定甘草次酸得率，而后经硅胶柱层析分离纯化，最终制备得纯度达90％的甘草次酸。与传统提取方法相比，利用该法制备的甘草次酸得率提高了约67％。本发明将蒸汽爆破技术应用于甘草次酸的制备中，可有效解决甘草次酸提取得率低、提取时间长、试剂用量大等问题。本发明经济、环保、处理时间短、便于大量生产、易于实施，亦可适用于辅助提取其他低含量的活性天然成分。

技术领域

本发明涉及天然产物中微量活性成分的制备领域，具体涉及一种利用蒸汽爆破技术结合酸回流法从甘草中高效提取甘草次酸的方法。

背景技术

甘草次酸是具有齐墩果烷型骨架的五环三萜类天然产物，甘草的重要活性成分之一，具有多种药理学方面作用，例如抗病毒、抗炎、抗溃疡、抗肿瘤、降血糖、降血脂等，是非常具备研发潜力的中药先导化合物。它天然存在于各种甘草(如光果甘草、胀果甘草、乌拉尔甘草、云南甘草等)中，但含量很低，一般在0.01～0.2％。目前，甘草次酸的获得通常是由甘草酸转化来的，最传统的方法是酸水解法，但是提取效率低，条件不容易控制，反应很容易发生异构化，而且不同的水解条件，也会产生不同的副产物，给分离纯化带来了很大困难。提取得率低、分离纯化困难等问题对于甘草次酸作为新药物的开发形成了严重阻碍，所以提高甘草次酸的得率具有十分重要意义。

蒸汽爆破预处理是近些年来发展起来的一项技术，此方法经济、环保、处理时间短、便于大量生产。它的原理是利用高温饱和蒸汽快速渗透进植物细胞组织中，然后在极短的时间内以爆破的方式释放，把热能瞬间转化为机械能，从而破坏植物的细胞组织，实现提取率的提高。汽爆过程可以分为两个过程，首先是蒸汽的蒸煮过程，水蒸汽受到压力的作用渗透到原料内部，使其质地变软，同时部分组分发生降解，纤维的结合度下降，使纤维束在爆碎过程中更易分离。其次是爆破过程，蒸汽释放瞬间所产生的强大机械力使软化的物料发生剪切形变。因为冲击波的速度远大于物料形变的速度，物料受到多次剪切力的作用，产生孔隙或裂缝甚至被撕裂。查阅大量文献发现，该技术已经被广泛应用于农作物废弃物的预处理、纺织工业、动物饲料以及各类食品的加工预处理等，而且有专利CN201410706855和专利CN201410754158利用蒸汽爆破技术提取了橘子皮果胶和柚子皮果胶，然而蒸汽爆破技术还没应用到天然产物中微量活性成分的提取中。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中甘草次酸提取得率低、消耗时间长、试剂用量大等问题，提供了一种甘草次酸提取得率高、经济环保、处理时间短、便于大量生产、易于实施的一种辅助提取的预处理技术。

本发明包括一种利用蒸汽爆破技术结合酸回流法从甘草中高效提取甘草次酸的方法，通过下述技术方案予以实现。

1、原料前处理：选取干净整齐的甘草切片，将其浸入水中。

2、汽爆处理：将湿润的甘草切片放入蒸汽爆破仪中，在不同压力和时间下进行汽爆，收集样品，干燥。

3、汽爆后处理：干燥后的样品粉碎、过筛，放入干燥器中保存。

4、甘草次酸的提取：称取一定量过筛后的甘草粉，按不同料液比加入提取液煮沸提取，提取多次，提取液浓缩至原体积三分之一，加稀硫酸加热回流水解，离心，弃上清液，水洗沉淀至中性，得到粗产物。

5、甘草次酸得率测定：利用香草醛--高氯酸比色法测定得率，一系列甘草次酸储备液制备标曲，蒸干溶剂，加入5％的香草醛冰乙酸溶液0.2mL，加入高氯酸0.8mL，摇匀，60℃水浴加热15min，取出后用流水冷却，加入4mL冰乙酸稀释摇匀后，稳定10min，在560nm处测定吸光度。粗产物配成1mg/mL乙醇溶液，以同样方法测定吸光度。