[发明专利]一种线性化载体自重组的质粒构建方法

权利要求书

1.一种线性化载体自重组的质粒构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)合成引物对；

2)使用上述引物，以质粒载体为模板进行PCR扩增；

3)PCR产物纯化回收，得到重组线性化载体；

4)转化，细菌体内自重组为质粒。

步骤1)所述引物每条含有两部分：第l部分是能与质粒载体互补的序列，位于引物3′端；第2部分是插入片段，位于引物5′端；

所述引物对中两条引物的“第2部分”的5′端具有10-15bp的反向互补序列。

2.如权利要求1所述的质粒构建方法，其特征在于，步骤1)所述引物对中两条引物的“第2部分”的5′端具有12bp的反向互补序列。

3.如权利要求1所述的质粒构建方法，其特征在于，所述质粒载体带有标记基因。

4.如权利要求3所述的质粒构建方法，其特征在于，所述标记基因是抗生素抗性基因。

5.如权利要求1所述的质粒构建方法，其特征在于，所述细菌是用于质粒扩增的大肠杆菌。