[发明专利]一种液质联用测定血浆中头孢羟氨苄浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液质联用测定血浆中头孢羟氨苄浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样品，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取两次，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为头孢羟氨苄的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为0.1～60ug/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中头孢羟氨苄的浓度。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物的测定方法，特别涉及一种液质联用测定血浆中头孢羟氨苄浓度的方法。

背景技术

头孢羟氨苄(Cefadroxil，CFD)，化学名称为：(6R，7R)-3-甲基-7-[(R)-2-氨基-2-(4-羟基苯基)乙酰氨基]-8-氧-5-硫杂-1-双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸一水合物，分子式：C₁₆H₁₇N₃O₅S·H₂O，分子量为：381.41，结构式为：

头孢羟氨苄是一种杀菌的头孢菌素类广谱抗生素，美国勃列斯多-迈耶公司第一代半合成的头孢菌素类药物，对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的感染有效。口服头孢羟氨苄制剂可用于治疗轻度至中度易受感染，如因细菌化脓性链球菌引起的咽喉炎或链球菌扁桃体炎、尿路感染、生殖道感染和皮肤感染，其具有良好的水溶性和一定的脂溶性，口服吸收良好，而且不受胃内食物影响，在肠胃道吸收和尿中消除都比较慢，在感染病灶有较强的分布能力及抗菌作用。因此，头孢羟氨苄制剂的药用经济性高，具有广阔的市场前景。

目前，尚未关于头孢羟氨苄测定方法的文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中头孢羟氨苄浓度的方法，该方法可提高检测的速度、精度和灵敏度。

为实现上述目的，一种液质联用测定血浆中头孢羟氨苄浓度的方法，血浆样品经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样品预处理：

以K₂EDTA为抗凝剂，以头孢羟氨苄-d4为内标；于96深孔板中精密加入100uL的血浆样品，加入5uL的体积分数为50％的甲醇水溶液，混匀后加入5uL的0.02ug/uL的内标头孢羟氨苄-d4溶液，混匀后加入500uL乙腈于96深孔板中，涡旋混合1min，于6℃以3000rpm离心10min，取上层清液50uL至装有1000uL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为甲醇：水：甲酸按照体积比85：15：0.1混合得到的混合物，涡旋混匀，于6℃以3000rpm离心5min后作为测试样品待检测；以上过程中除了涡旋和离心，其他过程均需于冰浴条件下操作；

(2)试样测定：

取10uL测试样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中头孢羟氨苄和内标头孢羟氨苄-d4的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的头孢羟氨苄浓度；

(3)液相色谱条件：

色谱柱：RestekAllure PFPP，5um，柱规格为50×2.1mm；色谱柱温：40℃；流动相A：水/甲酸的体积百分比为100/0.1；流动相B：甲醇/甲酸的体积百分比为100/0.1；洗液：乙腈/水的体积百分比为50/50；自动进样器温度为6℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10uL，分析时间3.5min；

(4)质谱条件：