[发明专利]一种3-羟基丙酸产生菌株的筛选方法

权利要求书

1.一种3-羟基丙酸产生菌株的筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）、富集土壤菌种：取5份1g土样于5个装有100mL富集培养基的250mL的三角瓶中, 37℃摇床振荡培养，再180 r/min培养24 h；再分别取5mL富集培养液转接到各项碳源利用培养基中，250mL三角瓶装液量100mL,37℃摇床180r/min振荡培养1-2d；

2）、培养液的处理：取步骤1）中培养完成的培养液5mL, 再以2000r/min离心5min取上清液,用强酸型732阳离子交换树脂进行处理,处理完成的样品待测；

3）、检测目标菌株：先采用HPLC分析法再使用纸层析法检测样品中是否有目标菌株；

4）、菌株的纯化：将步骤3）中检测出的样品得到的菌落放置在含有土霉素的无机盐固体培养基平板上划线，进行分离和纯化；此步骤重复2-3次，直至得到单一菌落；然后将单菌落接入含有土霉素的无机盐液体培养基中,置于30-38℃,150r/min震荡条件下,遮光培养36-48h,得到单菌落培养液；

5）、目标菌株的提取：将含有目标菌株的培养液粗品溶液与有机溶剂充分混合，通过蒸馏的方法得到含有3-羟基丙酸的有机相或纯化的3-羟基丙酸即可。

2.根据权利要求1所述的一种3-羟基丙酸产生菌株的筛选方法，其特征在于，所述步骤1）中的土样在采样时先去除5cm表土，采集5-15cm深的土壤。

3.根据权利要求1所述的一种3-羟基丙酸产生菌株的筛选方法，其特征在于，所述富集培养基是由胰蛋白胨1.7,大豆胨0.3，葡萄糖2.5, Na0H5，K₂HP0₄ 2.5，水100，pH 7.1- 7.5，115℃蒸汽灰菌20min制成。

4.根据权利要求1所述的一种3-羟基丙酸产生菌株的筛选方法，其特征在于，所述碳源利用培养基是由酪蛋白胨0.5，葡萄糖0.25，NaC10.5，K₂HP0₄0.25，碳源1.5，水100，pH7.5，115℃蒸汽灭菌20min制成。

5.根据权利要求1所述的一种3-羟基丙酸产生菌株的筛选方法，其特征在于，所述步骤1）中的碳源包括葡萄糖、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、甘油、木糖。

6.根据权利要求1所述的一种3-羟基丙酸产生菌株的筛选方法，其特征在于，所述步骤4）中的震荡加入的碱性催化剂由在水中能电离出氢氧根的均相和多相碱性物质组成。

7.根据权利要求6所述的一种3-羟基丙酸产生菌株的筛选方法，其特征在于，所述碱性催化剂为氢氧化钠、氢氧化钙、有机胺、氢氧化镁、镁铝水滑石、 碱性分子筛、氧化铝中的一种或多种。

8.根据权利要求1所述的一种3-羟基丙酸产生菌株的筛选方法，其特征在于，所述步骤1）中的有机溶剂是由酯类、酮类、醇类、磷酸酯类、磷氧类、膦硫类、胺类、及其他有机化合物中的一种或多种组成，且所述有机化合物的沸点在常压下均大于100℃。