[发明专利]鉴定阿胶中驴源性成分的特异性引物、试剂盒及鉴别方法

权利要求书

1.一种鉴定阿胶中驴源性成分的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)对含阿胶的待测样品进行预处理，具体步骤为：取待测样品，加适量水，所述待测样品与水的用量比为：3～4重量份：30～50体积份；所述重量份和体积份的比值关系为g/ml；温浴烊化，得样品溶液，将样品溶液置于分子量为1～2kd的透析袋中，然后使用适量水作为透析介质对样品溶液进行透析，所述透析袋内部的样品溶液与透析袋外部的透析介质的体积比为30～50：700～900，重复透析2～3次，每次3～12小时，收集合并透析液，60～80℃的范围内浓缩蒸干，即得预处理样品；

(2)提取预处理样品中的总DNA，备用；

(3)以步骤(2)中提取的DNA为模板，采用如下引物进行PCR扩增：

上游引物：5′-CCCCATCATTCCTACTTCTTCT-3′；

下游引物：5′-TAGGGGAGGATATACGGTTCAG-3′；

(4)测定步骤(3)中所得的PCR扩增产物的大小，若所述PCR扩增产物中含有80bp的DNA片段，则所述待测样品中存在驴源性成分；反之，则所述待测样品中不存在驴源性成分；所述待测样品预处理方法为透析预处理。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，PCR反应体系为：

DNA模板，20～40ng/μL，1～5μL；

上游引物，10μM，0.5～1.5μL；

下游引物，10μM，0.5～1.5μL；

Taq DNA聚合酶，5U/μL，0.2～1.2μL；

dNTPs，10mM，0.25～1μL；

10×PCR扩增缓冲液，1.5～4.5μL；

无菌超纯水补至25μL。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，PCR扩增程序如下：95℃预变性5min；94℃变性30s，53～55℃退火30s，72℃延伸30s，进行30～40个循环；然后继续72℃延伸5～10min，降温至4℃，获得的扩增产物4℃保存。