[发明专利]一种液质联用测定血浆中头孢氨苄浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液质联用测定血浆中头孢氨苄浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样品，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取两次，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为头孢氨苄的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为0.1～50ug/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中头孢氨苄的浓度。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物的测定方法，特别涉及一种液质联用测定血浆中头孢氨苄浓度的方法。

背景技术

细菌感染是致病菌或条件致病菌侵入血循环中生长繁殖，产生毒素和其他代谢产物所引起的急性全身性感染，临床上以寒战、高热、皮疹、关节痛及肝脾肿大为特征，部分可有感染性休克和迁徙性病灶。

头孢氨苄为美国Eli Lilly公司1970年上市的半合成口服头孢类抗生素，其通过抑制细胞壁的合成，使细胞内容物膨胀至破裂溶解，从而达到杀菌作用。该品为广谱抗生素，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抗菌作用，注射后吸收迅速而完全，生物利用率高，特别加入增效抗炎因子，使该品具有标本兼治得效果，其杀菌能力比青霉素类大20倍，比磺胺类大10倍、比喹诺酮类大5倍。

头孢氨苄吸收良好，空腹口服该品0.5g后1h达血药峰浓度，平均为18mg/L；血消除半衰期(t_1/2)为0.6～1.0h，加服丙磺舒可提高血药浓度，t_1/2b可延长至1.8h；肾衰竭时t_1/2b可延长至5～30h；新生儿t_1/2b为6.3h。该品吸收后广泛分布于各组织体液中；可透过胎盘进入胎儿血循环，产妇羊水；约5％的口服给药量自胆汁排出；血清蛋白结合率为10％～15％；该品体内不代谢，24小时尿中累积排出给药量的80％～90％。

目前，用于检测头孢氨苄的方法主要有微生物法、色谱法或色谱-质谱联用分析法、免疫分析法等。微生物检测法操作简单，但其检测周期长且结果误差较大。免疫分析法技术虽然检测速度快，但是应用于该技术的免疫层析检测试纸条或试纸盒的制作工艺繁琐，制作成本高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中头孢氨苄浓度的方法，该方法可提高检测的速度、精度和灵敏度。

为实现上述目的，一种液质联用测定血浆中头孢氨苄浓度的方法，血浆样品经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样品预处理：

以K₂EDTA为抗凝剂，以头孢氨苄-d5为内标；于96深孔板中精密加入100uL的血浆样品，加入5uL体积分数为98％的乙腈水溶液，混匀后加入5uL的0.04ug/uL的内标头孢氨苄-d5溶液，混匀后加入1000uL乙腈于96深孔板中，涡旋混合1min，于6℃以3000rpm离心10min，取上层清液20uL至装有980uL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为水：甲酸：1mol/L的醋酸铵按照体积比100：0.1：0.1混合得到的混合物，涡旋混匀，于6℃以3000rpm离心5min后作为测试样品待检测；以上过程中除了涡旋和离心，其他过程均需与冰浴条件下操作；

(2)试样测定：

取10uL测试样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中头孢氨苄和内标头孢氨苄-d5的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的头孢氨苄浓度；

(3)液相色谱条件：

色谱柱：Agilent ZORBAX XDB-C18，5um，柱规格为50×2.1mm；色谱柱温：40℃；流动相A：水/甲酸的体积百分比为100/0.1；流动相B：乙腈/甲酸的体积百分比为100/0.1；洗液：乙腈/水的体积百分比为50/50；自动进样器温度为6℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10uL，分析时间3.5min；