[发明专利]捻转血矛线虫虫卵的鉴别方法及其应用

说明书

本发明提供了一种捻转血矛线虫虫卵的鉴别方法及其应用，涉及线虫鉴别领域。本发明的捻转血矛线虫虫卵的鉴别方法，包括以下步骤：收集线虫虫卵，所述线虫虫卵包括：捻转血矛线虫虫卵、奥斯特线虫虫卵、夏伯特线虫虫卵和食道口线虫虫卵；通过观察培养后的各个线虫虫卵中含幼虫虫卵的数量、线虫虫卵的气室及外观形态和线虫虫卵能否与花生凝集素相结合，以将捻转血矛线虫虫卵与奥斯特线虫虫卵、夏伯特线虫虫卵和食道口线虫虫卵区分开来。该方法操作简单，成本低，能够准确高效地将捻转血矛线虫虫卵与其他三种线虫区分开来，能够缓解动物体内捻转血矛线虫检测困难，检测成本高、操作复杂和捻转血矛线虫虫卵与其他线虫虫卵不易区分的技术问题。

技术领域

本发明涉及线虫鉴别领域，尤其是涉及一种捻转血矛线虫虫卵的鉴别方法及其应用。

背景技术

牛羊消化道常见的线虫有捻转血矛线虫、奥斯特线虫、夏伯特线虫和食道口线虫等，其中捻转血矛线虫是致病力最强、且对牛羊危害最为严重的一种寄生线虫，该线虫主要寄生于牛羊的皱胃，偶见小肠，依靠吸食宿主血液而生。当前流行的检测寄生虫病的方法有虫卵检测方法、免疫学检测方法和核酸检测方法。这些检测方法对于鉴别诊断牛羊捻转血矛线虫病非常重要。其中，虫卵检测具有直观、准确，操作简单，能反应宿主的感染状况，是首选方法，只有在虫体或虫卵检测方法困难的情况下，才采用免疫学或分子学检测方法。但由于多数虫卵在外观形态上差异极小，仅凭显微镜拍摄照片或尺寸难以将虫卵区分开来，先前虽有较多关于捻转血矛线虫虫卵形态的描述，但却没有找到能将其与其他虫卵区分开来的独特特征。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种捻转血矛线虫虫卵的鉴别方法，该方法操作简单，成本低，能够准确高效地将捻转血矛线虫虫卵与奥斯特线虫虫卵、夏伯特线虫虫卵和食道口线虫虫卵区别开来，能够解决上述问题中的至少一种。

本发明的第二个目的在于提供一种捻转血矛线虫虫卵的鉴别方法在捻转血矛线虫与其他线虫鉴别中的应用。

为了解决上述技术问题，特采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种捻转血矛线虫虫卵的鉴别方法，包括以下步骤：

收集线虫虫卵，所述线虫虫卵包括：捻转血矛线虫虫卵、奥斯特线虫虫卵、夏伯特线虫虫卵和食道口线虫虫卵；

通过观察培养后的各个线虫虫卵中含幼虫虫卵(虫卵内胚胎似蝌蚪或蛇形样)的数量、线虫虫卵的气室及外观形态和线虫虫卵能否与花生凝集素相结合，以将捻转血矛线虫虫卵与奥斯特线虫虫卵、夏伯特线虫虫卵和食道口线虫虫卵区分开来。

作为进一步技术方案，所述收集线虫虫卵为采用沉淀法或漂浮法收集动物粪便中的线虫虫卵；优选采用沉淀法收集动物粪便中的线虫虫卵；

优选地，所述沉淀法包括以下步骤：将粪便粉碎，于滤网上冲洗过滤得到滤液，然后将滤液再过滤2～3次，静置得到沉淀，将沉淀用水清洗后得到虫卵；

优选地，所述滤网为40～120目，优选为60～100目；

优选地，所述动物粪便取自动物直肠；

优选地，所述动物粪便包括牛粪便和/或羊粪便。

作为进一步技术方案，所述观察为显微镜观察；

优选地，所述显微镜的放大倍数为200～640倍，优选为400倍。

作为进一步技术方案，所述培养为将收集的线虫虫卵放置于生理盐水中培养3～4天，优选为4天；

优选地，培养的温度为20～30℃，优选为23℃。

作为进一步技术方案，所述捻转血矛线虫虫卵和奥斯特线虫虫卵中含有幼虫虫卵(虫卵内胚胎似蝌蚪或蛇形样)的数量大于夏伯特线虫虫卵和食道口线虫虫卵中含有幼虫的虫卵的数量；