[发明专利]一种胎盘血NK细胞的培养方法

说明书

本发明涉及细胞培养领域，特别涉及一种胎盘血NK细胞的培养方法，包括以下步骤：包被有CD16单抗的培养容器中接种由胎盘血分离得到的PBMC细胞，培养，培养体系是以VIVO‑15基础培养基为基础添加以下成分：FBS、IL‑2、IL‑12、IL‑15；培养4‑4.5天后，扩培，扩培所用的培养体系是在GT‑T581基础培养基的基础上添加以下成分：FBS、IL‑2、IL‑12、IL‑15。本发明提供的胎盘血NK细胞的培养方法，操作易行，成本低廉，得到更多量满足临床使用标准的NK细胞，为胎盘血NK细胞的应用提供良好的基础。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，具体而言，涉及一种胎盘血NK细胞的培养方法。

背景技术

NK细胞又称为自然杀伤细胞，属于大颗粒淋巴细胞，来源于骨髓，分布于外周血、肝脏及脾脏，少量分布于淋巴结及其他组织中，占外周血淋巴细胞的5％～15％，是重要的免疫细胞。NK细胞是身体初期防御的重要机构，具有强力的细胞毒活性。同时发挥免疫调节作用，快速提升免疫力和康复质量科学家在1975年首次鉴定到了NK细胞，这类细胞能够在缺少T、B细胞的情况下直接杀伤肿瘤细胞。与具有细胞毒性的CD8+T细胞不同，NK细胞杀伤肿瘤细胞时不需要预先致敏可以直接杀伤MHC阴性的肿瘤细胞，这使得NK细胞在过继细胞免疫治疗中被广泛应用。但NK细胞在外周血淋巴细胞中所占的比例较低，所以有必要建立一种NK细胞体外扩增技术，用于研究NK细胞的功能并为肿瘤的细胞免疫治疗奠定基础。目前人们对于脐带血的应用比较广泛，但对于胎盘血的应用很少。

近年来，有人采用基因工程的方法在K562细胞上同时表达IL-15、CD137L等分子,并以此细胞来刺激NK细胞的增殖。或者使用磁珠筛选CD56-细胞等方法培养NK细胞。上述方法在操作条件和成本上都较高，为NK细胞的临床使用造成了一定的困难。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种胎盘血NK细胞的培养方法，操作简便，成本低，可以得到大量满足临床使用标准的NK细胞，为胎盘血NK细胞的应用提供良好的基础。

胎盘是胎儿与母体之间物质交换的重要器官，是人类妊娠期间由胚胎胚膜和母体子宫内膜联合长成的母子间组织结合器官。胎儿在子宫中发育，依靠胎盘从母体取得营养，而双方保持相当的独立性。

胎盘血的采集量一般在150mL以上，最多可以采集250mL，可采集量高于脐带血。胎盘血中富含原始造血干细胞，其数量和质量与骨髓媲美，数量高于脐带血中造血干细胞含量。

本发明利用胎盘血中提取的单核细胞，培养所需细胞，为胎盘血的应用提供了可能。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种胎盘血NK细胞的培养方法，包括以下步骤：

包被有CD16单抗的培养容器中接种由胎盘血分离得到的PBMC细胞，培养，培养体系是以VIVO-15基础培养基为基础添加以下成分：以培养体系的体积计，FBS 50±2μL/mL，IL-2 500±10IU/mL，IL-12 2.5±0.2ng/mL，IL-15 20±2ng/mL；

培养4-4.5天，接种于包被有CD16单抗的培养容器中扩培，扩培培养体系是以GT-T581基础培养基为基础添加以下成分：以扩培培养体系的体积计，FBS 50±2μL/mL，IL-2500±10IU/mL，IL-12 2.5±0.2ng/mL，IL-1550±2ng/mL；

所述扩培至少一次。

本发明提供的胎盘血NK细胞的培养方法，特定选用在不同的基础培养基上添加相应的组分进行初始培养和扩培，操作简便，成本低，有效得到大量满足临床使用标准的NK细胞，为胎盘血NK细胞的应用提供良好的基础。

进一步地，所述包被有CD16单抗的培养容器均采用以下方法制备：