[发明专利]淡水鱼中孔雀石绿的快速提取和检测方法

权利要求书

1.淡水鱼中孔雀石绿的快速提取和检测方法，其特征在于，包括：

步骤1，将淡水鱼放在含有孔雀石绿的水中培养24h，可食部分去除鱼鳞、鱼皮和骨头，鱼肉中加入乙腈，快速提取，得到含有孔雀石绿MG和隐性孔雀石绿LMG的样品；

将样品提取液分成两份，在一份中加入硼氢化钾粉末，将孔雀石绿完全转化成隐性孔雀石绿，采集转化后不含孔雀石绿的样品本底紫外-可见光谱数据N，另一份直接采集样品紫外-可见光谱作为待测样本数据c；

步骤2，建立孔雀石绿标准品数据库V，用分析天平准确称取孔雀石绿标准品，采用乙腈溶解标准品固体，配成标准储备液，再将标准储备液分别稀释成不同浓度的标准品，采集全波长下的紫外-可见光谱数据，经最小二乘回归法得到孔雀石绿标准品的紫外-可见光谱数据库V；

步骤3，采用向量-子空间夹角判据方法计算样品的孔雀石绿含量；

所述向量-子空间夹角判据方法包括：

(1)根据定量精度设定扣减步数Δ；

(2)在算式y_i＝a_ix+b_i中带入较大的x₁值，得到v₁，y_i表示i 波长下孔雀石绿的吸光度值，a_i、b_i指代常数，x表示孔雀石绿的浓度，v₁即为浓度为x₁下孔雀石绿的多波长吸光度y₁，v₁是所有y_i的值所组成的矩阵；

(3)从光谱数据c中扣除v₁/Δ，扣除后的变量记为d_c；将本底数据N和变量d_c合并，记为对照空间R，计算对照空间R与v₁的夹角；

(4)从光谱数据c中一步一步扣除v₁，重复步骤(3)，计算R与v₁夹角值；

(5)重复步骤(4)，当光谱数据c中孔雀石绿完全被扣除后，对照空间R和v₁的空间夹角会出现最大值θ_max，记录θ_max出现时所对应的扣减步数λ_max，通过孔雀石绿的浓度x₁和扣减步数λ_max，计算样品中孔雀石绿的含量y₁；计算方法为y₁＝x₁×λ_max/Δ，得到的y₁值即为样品中孔雀石绿的含量；若空间夹角所对应的扣减步数为1，或者空间夹角值随扣减步数单调递增/递减，则样品中不含待测组分孔雀石绿；

孔雀石绿检出限为100μg/kg，0.002μg/mL；步骤1中，1mL10.0μg/mL孔雀石绿可以完全转化成6.5μg/mL隐性孔雀石绿，硼氢化钾粉末的加入量为0.8mg，加入过量的硼氢化钾不影响其他本底组分的含量。

2.根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：步骤1中，所述淡水鱼为不同品种的多个淡水鱼。

3.根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：所述快速提取，具体是样品加乙腈后在10000r/min匀浆机中匀浆，加入5g酸性氧化铝，200-300目净化，然后用快速混匀器振荡，在4000r/min高速离心机离心5min，上清液过0.45μm微孔滤膜。

4.根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：步骤1中，加入硼氢化钾粉末后，样品进行高速离心，取上清液进行检测。

5.根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：步骤1中，取样时，鱼肉样品不少于5g。