[发明专利]一种锰过氧化氢酶在枯草芽孢杆菌表达体系构建方法有效
| 申请号： | 201910045910.4 | 申请日： | 2019-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN109486777B | 公开（公告）日： | 2021-10-29 |
| 发明（设计）人： | 李正强;王明琦;曹新宇;张闯 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | C12N9/08 | 分类号： | C12N9/08;C12N15/75;C12N1/21;C12R1/125 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人： | 陈宏伟 |
| 地址： | 130011 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 过氧化氢酶 枯草 芽孢 杆菌 表达 体系 构建 方法 | ||
1.一种锰过氧化氢酶在枯草芽孢杆菌中表达构建的方法，包括以下步骤：
1）以嗜热菌Geobacillus sp. WCH70的基因为模板，设计引物；
上游引物：5' GGAATTCCATATGTGGATTTATGAAAAAAAAT3'；
下游引物: 5' CCGCTCGAGTTAGTGATGGTGATGGTGATGAAAAATTTTATTGCGGT 3' ；
上游引物 5'端CATATG为NdeⅠ酶切位点，保护碱基GGAATTC；
下游引物5'端CTCGAG为XholⅠ酶切位点，保护碱基CCG；
通过PCR反应扩增3’端含有6个组氨酸标签的嗜热锰过氧化氢酶GWC基因如：SEQ IDNo. 1所示；
2）将步骤1）得到的嗜热锰过氧化氢GWC基因，酶切后与酶切后的穿梭质粒pBE-S连接，得到重组穿梭质粒pBE-S-GWC；
3）将步骤2）得到的重组穿梭质粒pBE-S-GWC酶切后与信号肽文库SP DNA-mix通过同源重组连接，得到质粒文库pBE-S-GWC-SP；
4）将质粒文库pBE-S- GWC -SP转化到枯草芽孢杆菌表达宿主RIK1285中，选取携带48种不同信号肽的重组菌株进行表达，随后筛选出蛋白分泌能力最高的重组枯草芽孢杆菌是由信号肽yoqH所协助，yoqH基因如：SEQ ID No. 2所示，即得锰过氧化氢酶工程菌yoqH-RIK1285-GWC。
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