[发明专利]呕吐毒素及其衍生物适配体亲和柱及其制备方法与应用

说明书

本发明提供呕吐毒素及其衍生物适配体亲和柱及其制备方法与应用。所述亲和柱以N‑羟基琥珀酰亚胺修饰的琼脂糖为载体，然后将能够高亲和力、高特异性识别样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇、脱氧雪腐镰刀菌烯醇‑3‑葡萄糖苷、3‑乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇和15‑乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇的核酸适配体与载体进行共价偶联，偶联后的适配体复合载体装填亲和柱。所述亲和柱主要用于食品、饲料、牛奶、粮食作物以及中药等其他多种样本中呕吐毒素及其衍生物的纯化及净化，以利于后期对样本中此类毒素的高效液相色谱和快速检测。一次过柱可以净化富集4种毒素，重复使用次数可达到15次，回收率在80％以上，降低了成本，提高了样品的前处理效率。

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，具体地说，涉及呕吐毒素及其衍生物适配体亲和柱及其制备方法与应用。

背景技术

DON及其衍生物属于真菌毒素的一种，又名致呕毒素，是一种单端孢霉烯族毒素，主要由某些镰刀菌产生。Vesonder等于1973年从引起美国母猪拒食与呕吐的饲料和玉米中分离得到了此类化合物，并将其命名为呕吐毒素。单端孢霉烯族类毒素，在化学结构上C-9与C-10之间有一个双键，C-12与C-13位有一个氧环，同时其他位置还包含羟基和乙酰基基团。DON是由一个12，13-环氧基、一个α，β-不饱和酮基和3个-OH功能团组成，其化学名称为3，7，l5-三羟基-12，l3-环氧单端孢霉-9-烯-8-酮(3，7，l5-trihydroxy-12，13-epoxytrichothec-9-en-8-one)，分子式C₅H₂₀O₆，相对分子质量为296.3，其纯品是一种无色针状结晶，熔点为(151～153)℃，可溶于水和极性溶剂，如含水甲醇、含水乙醇或乙酸乙酯等，在乙酸乙酯中可长期保存。DON具有较强的热抵抗力和耐酸性，其在120℃时很稳定，当温度升高到180℃时依旧比较稳定，在温度升至210℃持续加热30～40min的情况下可被破坏。因此在一般的烹饪过程中，食物中的DON不易受食品加工的影响被破坏。DON的耐藏力也很强，有研究发现，将病麦在实验室中储藏4年，其毒性并未发生改变。

呕吐毒素(脱氧雪腐镰刀菌烯醇)与其衍生物脱氧雪腐镰刀菌烯醇-3-葡萄糖苷(DON-3G)、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-AcDON)和15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-AcDON)4种毒素，在大部分样品中同时检出率较高，对农作物产生联合污染，误食这种农作物后，在体内可以相互影响。由于呕吐毒素及其衍生物危害较大，因而寻找一种简单、快速、准确、经济、特异性的前处理方法，消除基质干扰，对于研究呕吐毒素及其衍生物的污染状况具有重要意义。

目前食品、饲料和粮食样品中的呕吐毒素及其衍生物检测方法有薄层色谱法，高效液相色谱法、酶联免疫吸附法，毛细管电泳法、液质联用法等。其中薄层色谱法是最早使用也是最广泛使用的检测呕吐毒素及其衍生物的方法，其优点是适合于没有经过专门培训的人员操作，且成本低、无需价格昂贵的仪器。但是，薄层色谱法的样品处理繁琐，实验过程复杂，所需检测周期较长，容易受到杂质的干扰。测定时用目测半定量，存在主观影响较大，灵敏度不高等缺点，已远远不能满足现代检测要求。

酶联免疫吸附法具有检测特异性好、灵敏度高、并且检测成本较低的优点，适用于基层机构大量样品的筛选和普查，可以大大节省时间和费用。酶联免疫吸附法的主要问题是容易造成假阳性。因此，主要用于基层的筛查检测。

高效液相色谱法、毛细管电泳法和液质联用法等仪器分析方法具有准确度高、灵敏性强、可微量测定等优点，是目前常用的食品中毒素检测的方法。但因其对样品纯度要求较高，需要经过一些前处理过程，导致检测成本高、周期长，无法满足大批量样品快速筛选的要求。而传统的前处理技术有免疫亲和柱、多功能净化柱等，这些净化柱价格较贵，且多为一次性的。因此，建立高选择、快速有效的样品前处理技术已成为呕吐毒素及其衍生物检测分析中亟需解决的重要问题。