[发明专利]一种检测牛肌肉HSL基因表达量的方法在审
| 申请号： | 201910046862.0 | 申请日： | 2019-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN109628562A | 公开（公告）日： | 2019-04-16 |
| 发明（设计）人： | 敖日格乐;斯木吉德;王纯洁 | 申请（专利权）人： | 内蒙古农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 010018 内蒙古自*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肌肉 检测 基因表达量 表达水平 种检测 可用 基因 基因特异性引物 内参引物GAPDH 基因表达水平 定量分析 基因功能 扩增 参考 分析 研究 | ||
1.一种检测牛肌肉HSL基因表达量的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
1)从待检测的牛肉组织中提取总RNA，再通过反转录反应制备cDNA样品；
2)将制备的cDNA样品进行荧光定量实时PCR检测，内参基因GAPDH的qPCR扩增反应体系为：Rremix Ex TaqTM II 10.0μL，ddH2O 8μL，G-F 0.5μL，G-R 0.5μL，牛的肌肉组织cDNA 1.0μL；
牛HSL基因的qPCR扩增反应体系为：Rremix Ex TaqTM II 10.0μL，ddH2O 8μL，H-F 0.5μL，H-R 0.5μL，牛肌肉组织cDNA 1.0μL；
3)在定量PCR仪上进行检测，荧光信号在每个循环结束时检测，每个样品3个重复，计算牛HSL基因的表达量。
2.根据权利要求1所述的一种检测牛肌肉HSL基因表达量的方法，其特征在于：所述引物对G-F和G-R的序列为：
G-F：5’-CGTGTCTGTTGTGGATCTGACCTG-3’，
G-R：5’-CAACCTGGTCCTCAGTGTAGCCT-3’。
3.根据权利要求1所述的一种检测牛肌肉HSL基因表达量的方法，其特征在于：所述引物对P-F和P-R的序列为：
H-F：5’-GATGAGAGGGTAATTGCCG-3’，
H-R：5’-GGATGGCAGGTGTGAACT-3’。
4.根据权利要求1所述的一种检测牛肌肉HSL基因表达量的方法，其特征在于：所述内参基因GAPDH和牛HSL基因的qPCR扩增反应程序相同，均为：95℃预变性30sec，95℃变性30sec，58℃退火1min，72℃延伸20sec，40个循环。
5.根据权利要求1所述的一种检测牛肌肉HSL基因表达量的方法，其特征在于：所述引物G-F、G-R、H-F和H-R的浓度均为20μmol/L。
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