[发明专利]一种检测牛肌肉PPARγ基因表达量的方法

说明书

本发明公开了一种检测牛肌肉PPARγ基因表达量的方法，本发明通过设计PPARγ基因特异性引物对，内参引物GAPDH的qPCR扩增，以及对qPCR结果的相对定量分析，准确、快速地分析了PPARγ基因在牛肌肉中的表达情况。本发明所建立的检测PPARγ基因表达水平的qPCR检测方法，可用于精确检测不同品种牛肌肉PPARγ基因的表达水平。该发明所述方法可用于检测不同品种牛肌肉PPARγ基因的表达水平，对深入研究牛PPARγ基因功能提供参考，方法简便，易操作。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，特别指一种检测牛肌肉PPARγ基因表达量的方法。

背景技术

复过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome pro-liferators-activatedreceptor，PPAR)是一类属于转录因子超家族成员的由配体激活的核转录因子。PPARs在哺乳动物中拥有α、δ、γ3个亚型，作为在脂肪细胞分化过程中必不可少的且起着核心的作用的PPARγ，主要表达于脂肪组织和免疫系统，具有正向调节脂肪细胞分化的作用。PPARγ在C/EBPs等相关脂肪因子的相互作用下，通过多条信号通路参与影响脂肪细胞的增殖和分化。不同物种动物在脂肪形成的机制方面并不完全相同，因此，PPARγ基因在不同物种动物机体内的分布也有所差异。另外，脂肪细胞的转录调控是一个复杂生理过程，PPARγ基因调控在众多脂类代谢的目的基因表达的过程中扮演重要角色，从而认为PPARγ是脂肪形成过程中关键因子。同时多种转录因子也可直接或间接影响PPARγ的功能，发挥对脂肪细胞增值和分化的调控作用。目前关于该基因在牛肌肉上的报道较少。因此需要开发一种能够准确检测牛肌肉PPAR基因表达量的方法，以便于其在肉品质研究中的应用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种检测牛肌肉PPARγ基因表达量的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种检测牛肌肉PPARγ基因表达量的方法，具体包括以下步骤：

1)从待检测的牛肉组织中提取总RNA，再通过反转录反应制备cDNA样品；

2)将制备的cDNA样品进行荧光定量实时PCR检测，内参基因GAPDH的qPCR扩增反应体系为：Rremix Ex TaqTM II(Perfect ReaL Time)10.0μL，ddH₂O 8μL，G-F 0.5μL，G-R 0.5μL，牛的肌肉组织cDNA 1.0μL；

牛PPARγ基因的qPCR扩增反应体系为：Rremix Ex TaqTM II 10.0μL，ddH₂O8μL，P-F 0.5μL，P-R 0.5μL，牛肌肉组织cDNA 1.0μL；

3)在定量PCR仪上进行检测，荧光信号在每个循环结束时检测，每个样品3个重复，计算牛PPARγ基因的表达量。

在上述技术方案中，所述的引物对P-F和P-R的序列为：

P-F：5’-GTGAAGCCCATTGAGGACAT-3’，见序列表SEQ NO.1。

P-R：5’-AGCTGCACGTGTTCTGTCAC-3’，见序列表SEQ NO.2。

在上述技术方案中，所述的引物对G-F和G-R的序列为：

G-F：5’-CGTGTCTGTTGTGGATCTGACCTG-3’，见序列表SEQ NO.3。

G-R：5’-CAACCTGGTCCTCAGTGTAGCCT-3’，见序列表SEQ NO.4。

在上述技术方案中，所述内参基因GAPDH和牛PPARγ基因的qPCR扩增反应程序相同，均为：95℃预变性30sec，95℃变性30sec，58℃退火1min，72℃延伸20sec，40个循环。