[发明专利]一种蛋白的电荷异质性检测方法

权利要求书

1.一种蛋白的电荷异质性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：采用蛋白酶对待测蛋白进行酶切，分离酶切片段，对分离后的酶切片段进行变性还原和去糖基化修饰处理后，采用等电聚焦电泳进行电荷异质性检测；所述蛋白具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；所述进行变性还原处理和去糖基化修饰处理的酶切片段为不含免疫球蛋白Fc区的酶切片段；所述去糖基化修饰为去除蛋白中的N-糖基化修饰；所述变性还原处理是通过加入变性剂和还原剂对分离后的酶切片段进行处理。

2.根据权利要求1所述的蛋白的电荷异质性检测方法，其特征在于，所述蛋白酶选自木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、IdeZ蛋白酶或重组化脓性链球菌IgG降解酶。

3.根据权利要求2所述的蛋白的电荷异质性检测方法，其特征在于，所述蛋白酶为重组化脓性链球菌IgG降解酶。

4.根据权利要求1所述的蛋白的电荷异质性检测方法，其特征在于，所述分离酶切片段为采用亲和树脂分离方法对酶切片段进行分离；所述亲和树脂为蛋白A树脂或蛋白G树脂。

5.根据权利要求1所述的蛋白的电荷异质性检测方法，其特征在于，所述分离酶切片段为采用亲和树脂分离方法对酶切片段进行分离；所述亲和树脂为MabSelectTM树脂。

6.根据权利要求1所述的蛋白的电荷异质性检测方法，其特征在于，所述变性还原处理的步骤为：向分离后的酶切片段中加入盐酸胍和二硫苏糖醇，在50°C下进行变性还原；或向分离后的酶切片段中加入表面活性剂和二硫苏糖醇，在95°C下进行变性还原。

7.根据权利要求1所述的蛋白的电荷异质性检测方法，其特征在于，所述去糖基化修饰处理为采用去糖基化酶对酶切片段进行处理。

8.根据权利要求7所述的蛋白的电荷异质性检测方法，其特征在于，所述去糖基化酶选自N-糖酰胺酶F。

9.根据权利要求1所述的蛋白的电荷异质性检测方法，其特征在于，所述等电聚焦电泳为毛细管等电聚焦电泳。

10.根据权利要求9所述的蛋白的电荷异质性检测方法，其特征在于，所述等电聚焦电泳的步骤中采用的助溶剂为6mol/L的尿素，采用的载体两性电解质的pH值范围为3～10。