[发明专利]一种小桐子转基因苗育种法

说明书

一种小桐子转基因苗育种法，包括以下步骤：(1)小桐子种子苗生长出两片子叶时作为预备砧木；小桐子转基因苗作为接穗；(2)将接穗在多菌灵溶液中浸泡；(3)去掉预备砧木的顶端，从下胚轴正中向下劈开切口，制成砧木；将接穗下部削成楔形，插入切口；(4)将琼脂糖水溶液滴入切口；用封口膜包裹，覆盖塑料膜后置于温室育种；(5)两周后去除塑料膜，在遮荫条件下继续育种两天，去除遮荫再继续育种。本发明方法通过将小桐子转基因苗嫁接至健壮的小桐子种子苗上，从而育成健壮的小桐子转基因苗，并能大大加快小桐子转基因育种进程。

技术领域

本发明涉及嫁接种植技术领域，特别涉及一种小桐子转基因苗育种法。

背景技术

小桐子经过农杆菌介导转化外源基因获得转基因再生株，经分子检测外源基因已经转入小桐子中，转化的转基因苗是经过组织培养形成的植株；由于外源基因表达的原因，可能导致转基因苗根系发育较差或不生根，从而导致移栽时存活率低。

发明内容

本发明的目的是提供一种小桐子转基因苗育种法，针对不容易生根的小桐子转基因苗，将小桐子转基因苗嫁接至健壮的小桐子种子苗上，提高成活率。

本发明的方法包括以下步骤：

1、将小桐子种子播种在用水浇透的土壤中；当小桐子种子苗生长出两片子叶时，将其作为预备砧木；准备组织培养方法获得的小桐子转基因苗作为接穗；

2、将接穗在质量浓度为0.1～0.3％的多菌灵溶液中浸泡至少1h；

3、用刀去掉预备砧木的顶端，从下胚轴正中向下将预备砧木劈开1～1.5cm的切口，制成砧木；将浸泡后的接穗下部削成与砧木切口相配合的楔形，然后将楔形部分插入砧木的切口处；

4、将温度42～45℃的琼脂糖水溶液滴入切口处，使琼脂糖凝胶覆盖切口；所述的琼脂糖水溶液的质量浓度为0.3～0.4％，琼脂糖水溶液在温度降至35～45℃时形成凝胶；将塑料膜覆盖在接穗及砧木外，以防止水分蒸发太快，并将接穗及砧木置于温度28～35℃和湿度≥85％的温室内，开始育种；

5、育种两周后去除塑料膜，在遮荫条件下继续育种两天，然后去除遮荫，再继续育种5天，完成嫁接育种。

上述的组织培养方法获得的小桐子转基因苗为文献一种通过优化卡那霉素浓度和延迟筛选时间来提高农杆菌介导的小桐子转化效率的方法记载的方法制成。

上述方法完成嫁接育种后的小桐子转基因苗的成活率90％以上。

本发明方法通过将小桐子转基因苗嫁接至健壮的小桐子种子苗上，从而育成健壮的小桐子转基因苗，并能大大加快小桐子转基因育种进程。

具体实施方式

下面结合实例对本发明方法进行实例说明。

本发明实施例中，组织培养方法获得的小桐子转基因苗依据的文献为：

Stable genetic transformation of Jatropha curcas via Agrobacteriumtumefaciens-mediated gene transfer using leaf explants(农杆菌介导的小桐子叶片的遗传转化体系研究)；Nitish Kumar,Vijay Anand K Gopalakrishnan,SudheerPamidimarri et al.，Industrial Crops and Products，2010，32(1):41-47；

或者为：