[发明专利]基于脂质组鉴别超高温灭菌乳与复原乳的方法

权利要求书

1.一种基于脂质组鉴别超高温灭菌乳与复原乳的方法，其特征在于，包括步骤：

1)对超高温灭菌乳样品和复原乳样品进行提脂预处理，得到脂质样品；

2)采用高分辨质谱技术，分别对超高温灭菌乳和复原乳的脂质样品进行色谱分离-质谱扫描，包括一级扫描和二级离子碎片扫描；

3)对两种乳的脂质样品的峰进行提取、过滤，对各脂质成分进行定性分析，并对各脂质成分峰面积进行积分处理；

4)将积分结果进行正交偏最小二乘方差判别分析，确定出可将两种类型乳完全分类的表征因子；

5)利用筛选出的表征因子建立正交偏最小二乘方差判别模型，以区分超高温灭菌乳和复原乳；用色谱分离-质谱扫描未知乳样的脂质样品，基于所述正交偏最小二乘方差判别模型，对未知乳样进行鉴别；积分数值落在超高温灭菌乳区域内的判定为超高温灭菌乳，落在复原乳区域内的判定为复原乳；

所述提脂预处理为：向1体积份的超高温灭菌乳或复原乳的样品中加3～8体积份的水，涡旋；再加入10～20体积份的CHCl₃和MeOH混合溶液，涡旋、离心；取下层溶液进行氮吹；用5～15体积份的CHCl₃和MeOH混合溶液复溶；所述CHCl₃和MeOH混合溶液中CHCl₃:MeOH的体积比为2:1；

所述色谱分离的条件为：

采用的流动相A为含1～50mmol/L乙酸铵的乙腈水溶液，乙腈:水体积比为6:4，流动相B为含1～50mmol/L乙酸铵的异丙醇乙腈溶液，异丙醇:乙腈体积比为9:1；

洗脱梯度为:

质谱的条件为：正离子模式喷雾电压3.2kV，离子源温度320℃，鞘气流速35Arb,辅助气体流速10Arb；

负离子模式喷雾电压2.8kV，离子源温度320℃，鞘气流速35Arb,辅助气体流速10Arb；

正离子模式下，提取的表征因子计13个，为PC(18:0/18:1)，PE(16:0/18:1)，PE(18:0/18:1，PE(18:1/18:1)，PE(18:1/20:3，TG(15:0/10:0/14:0)，TG(16:0/8:0/18:1)，TG(4:0/10:0/15:0)，TG(4:0/11:2/16:1)，TG(4:0/8:0/15:0)，TG(6:0/14:1/18:3)，TG(6:0/15:0/18:2)，TG(6:0/18:0/18:1)；

负离子模式下，提取的表征因子12个，为12-Hydroxydodecanoic acid，16-Hydroxyhexadecanoic acid，3-Oxotetradecanoic acid，CL(18:1/18:0/18:0/18:1)，CL(22:3/16:0/18:1/18:1)，LPE(18:0)-H，LPE(18:1)，PE(16:0/18:2)，PE(18:1/14:0)，CL(18:1/16:0/18:0/18:0)-H，CL(22:3/18:1/18:1/18:1)-H，MGDG(18:1/18:1)；上述表征因子中，MGDG为脂肪酸甘油酯，PC为卵磷脂，PE为脑磷脂，TG为甘油三酯，LPE为溶血磷脂，CL为心磷脂，括号里是碳原子数。

2.根据权利要求1所述的基于脂质组鉴别超高温灭菌乳与复原乳的方法，其特征在于，所述复原乳样品是用全脂奶粉，按照蛋白质含量为3.0g/100mL配制而得。

3.根据权利要求1所述的基于脂质组鉴别超高温灭菌乳与复原乳的方法，其特征在于，对两种模式下判别分析的VIP值进行分析，正离子模式下，提取VIP1.5的脂质成分作为区别两种乳的表征因子；利用单因素方差法分析各表征因子的方差显著性。

4.根据权利要求1所述的基于脂质组鉴别超高温灭菌乳与复原乳的方法，其特征在于，对两种模式下判别分析的VIP值进行分析，负离子模式下，提取VIP1.3的脂质成分作为区别两种乳的表征因子，利用单因素方差法分析各表征因子的方差显著性。