[发明专利]一种通过悬浮震荡共培养制备重构胚胎的方法及其专用组合物有效
| 申请号： | 201910047139.4 | 申请日： | 2019-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN109749987B | 公开（公告）日： | 2021-10-01 |
| 发明（设计）人： | 韩建永;张少鹏;陈乃馨;陈天直 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通过 悬浮 震荡 培养 制备 胚胎 方法 及其 专用 组合 | ||
1.一种制备重构胚胎的方法，包括如下步骤：将三种干细胞进行悬浮震荡共培养，形成重构胚胎；所述三种干细胞为鼠胚胎干细胞、鼠滋养层干细胞和鼠胚外内胚层干细胞；
所述悬浮震荡共培养为：在非粘附细胞培养皿中，50rpm-90rpm水平振荡培养；
鼠胚胎干细胞、鼠滋养层干细胞和鼠胚外内胚层干细胞的数量配比依次为：0.8-1.2:0.8-1.2:0.8-3；
所述形成为自我聚合形成；
所述共培养采用重组胚胎培养基；所述重组胚胎培养基中不含有如下五种物质：FGF4、heparin、LIF、PD0325901和CHIR99021。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述共培养的时间为12小时以上。
3.三种干细胞和悬浮震荡培养体系在制备重构胚胎中的应用；所述三种干细胞为鼠胚胎干细胞、鼠滋养层干细胞和鼠胚外内胚层干细胞；
鼠胚胎干细胞、鼠滋养层干细胞和鼠胚外内胚层干细胞的数量配比依次为：0.8-1.2:0.8-1.2:0.8-3；
所述悬浮震荡培养体系为采用液相培养基在非粘附细胞培养皿中进行的50rpm-150rpm水平振荡培养的体系；所述液相培养基为重组胚胎培养基；所述重组胚胎培养基中不含有如下五种物质：FGF4、heparin、LIF、PD0325901和CHIR99021。
4.一种制备重构胚胎的方法，包括如下步骤：将两种干细胞进行悬浮震荡共培养，形成重构胚胎；所述两种干细胞为鼠胚胎干细胞和鼠胚外内胚层干细胞；
所述悬浮震荡共培养为：在非粘附细胞培养皿中，50rpm-90rpm水平振荡培养；
鼠胚胎干细胞和鼠胚外内胚层干细胞的数量配比依次为：0.8-1.2:0.8-3；
所述形成为自我聚合形成；
所述共培养采用重组胚胎培养基；所述重组胚胎培养基中不含有如下五种物质：FGF4、heparin、LIF、PD0325901和CHIR99021。
5.两种干细胞和悬浮震荡培养体系在制备重构胚胎中的应用；所述两种干细胞为鼠胚胎干细胞和鼠胚外内胚层干细胞；
鼠胚胎干细胞和鼠胚外内胚层干细胞的数量配比依次为：0.8-1.2:0.8-3；
所述悬浮震荡培养体系为采用液相培养基在非粘附细胞培养皿中进行的50rpm-150rpm水平振荡培养的体系；所述液相培养基为重组胚胎培养基；所述重组胚胎培养基中不含有如下五种物质：FGF4、heparin、LIF、PD0325901和CHIR99021。
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