[发明专利]基于内标校正的免疫精准定量分析方法及其专用试剂盒

权利要求书

1.一种试剂盒，其包括检测探针和内标探针；

所述检测探针为金属元素甲标记的物质A；

所述内标探针为金属元素乙标记的物质B；

所述金属元素甲和所述金属元素乙是互为同位素的同种金属元素或两种不同的金属元素；

所述物质A和所述物质B均为生物大分子。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：

所述检测探针为金属元素甲通过金属螯合试剂与物质A相结合所得到的金属元素甲标记的物质A；

所述内标探针为金属元素乙通过金属螯合试剂与物质B相结合所得到的金属元素乙标记的物质B；

或，

所述检测探针中，所述金属元素甲、所述金属螯合试剂、所述物质A的摩尔比为(20-25):(15-20):1；

所述内标探针中，所述金属元素乙、所述金属螯合试剂、所述物质B的摩尔比为(20-25):(15-20):1。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述同位素为天然同位素或浓缩同位素；

或，所述金属元素为稀土元素；

或，所述生物大分子为蛋白；

或，所述蛋白为抗原或抗体；

或，所述物质A为抗原；

或，所述物质B为抗体；

或，所述金属元素甲为¹⁵³Eu；

或，所述金属元素乙为¹⁵¹Eu；

或，所述金属螯合剂为DTPA或DOTA。

4.根据权利要求1-3任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括固相载体；

或，所述固相载体为96孔板或磁性微球。

5.权利要求1-4任一所述的试剂盒的制备方法，包括如下步骤：分别制备权利要求1-4任一所述的试剂盒中的检测探针和内标探针；

制备所述检测探针的方法包括如下步骤：将金属螯合剂与金属元素甲进行螯合反应，得到大环-稀土螯合物甲；然后将所述大环-稀土螯合物甲与物质A进行反应，得到金属元素甲标记的物质A；

制备所述内标探针的方法包括如下步骤：将金属螯合剂与金属元素乙进行螯合反应，得到大环-稀土螯合物乙；然后将所述大环-稀土螯合物乙与物质B进行反应，得到金属元素乙标记的物质B；

所述金属元素甲和所述金属元素乙是互为同位素的同种金属元素或两种不同的金属元素；

所述物质A和所述物质B均为生物大分子。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：

制备所述检测探针的方法包括如下步骤：

a1)将金属螯合剂与金属元素甲溶解在醋酸钠缓冲液中，反应，得到大环-稀土螯合物甲；

a2)将所述大环-稀土螯合物甲与物质A溶解在碳酸钠缓冲液中，反应，得到金属元素甲标记的物质A；

制备所述内标探针的方法包括如下步骤：

b1)将金属螯合剂与所述金属元素乙溶解在醋酸钠缓冲液中，反应，得到大环-稀土螯合物乙；

b2)将所述大环-稀土螯合物乙与物质B溶解在碳酸钠缓冲液中，反应，得到金属元素乙标记的物质B。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：

所述a1)中，所述金属螯合剂与所述金属元素甲的摩尔比为1：(1.1-2.0)；所述反应的条件为(25-37)℃反应10-60分钟；

所述a2)中，所述物质A与所述大环-稀土螯合物甲的摩尔比为1：(10-30)；所述反应的条件为常温反应12-24小时；

所述b1)中，所述金属螯合剂与金属元素乙的摩尔比为1：(1.1-2.0)；所述反应的条件为(25-37)℃反应10-60分钟；

所述b2)中，所述物质B与所述大环-稀土螯合物乙的摩尔比为1：(10-30)；所述反应的条件为常温反应12-24小时；

所述a1)和所述b1)中，所述醋酸钠缓冲液的浓度为0.5M，pH为5.8；

所述a2)和所述b2)中，所述碳酸钠缓冲液的浓度为0.05M，pH为8.5。