[发明专利]一种wsv049的siRNA在制备白斑综合症病毒制剂的应用

说明书

本发明涉及一种wsv049的siRNA在制备白斑综合症病毒制剂的应用，wsv049的siRNA的序列为：正义链：5'‑CUGGAAGAAAGUCUUCAAUCAGAUU‑3’反义链：5'‑UCUGAUUGAAGACUUUCUUCCAGUU‑3’。所述wsv049‑siRNA能够高效抑制WSSV的基因wsv049的表达，能够显著抑制WSSV在日本囊对虾及克氏原螯虾体内的复制，大幅降低由WSSV感染所导致的日本囊对虾及克氏原螯虾的死亡；能够显著提高病毒感染后虾血淋巴细胞的活力，能够增强日本囊对虾和克氏原螯虾对病毒的抵抗能力。本发明为白斑综合症病毒的防治提供了一种新的药物，可高效快速的抑制WSSV的增殖，不仅适用于海水养殖的日本囊对虾，同样也适用于淡水养殖的克氏原螯虾，适用范围广。

技术领域

本发明属于RNA干扰抗病毒领域，特别涉及一种wsv049的siRNA在制备白斑综合症病毒制剂的应用。

背景技术

日本囊对虾主要分布于印度、西太平洋地区，我国东南沿海也有少量分布。自上世纪70年代末，我国对虾养殖迅速发展成为海产养殖支柱产业，养殖量逐年攀升，带来了不可计数的经济效益并同时解决了成千上万人的就业问题。克氏原螯虾，也称为小龙虾，生命力顽强，对水文环境的整治有着极大的贡献，此外，克氏原螯虾肉质松软易消化，富含镁、锌、碘、硒等，能保护心血管系统，可减少血液中胆固醇含量，防止动脉硬化，有利于预防高血压及心肌梗塞。近年来，日本囊对虾和克氏原螯虾的养殖量逐年攀升，但各种问题也随之出现，其中最为严重，威胁最大的就是水产养殖过程中的病害问题，而各种病害中最为严重的是白斑综合症病毒(WSSV)。WSSV以其泛适性，高致病性，高死亡率而位居病害威胁之首。

白斑综合症杆状病毒复合体主要对虾的造血组织、结缔组织、前后肠的上皮、血细胞、鳃等系统进行感染破坏。急性感染会在短时间内引起虾摄食量大幅度下降，壳易剥离，并可见到明显白斑。从感染到死亡只有三到五天甚至更短，且传染性极强七天左右可以使虾池中70％的虾感染甚至死亡，给我国的水产养殖业带来难以估计的损失。虾类无脊椎动物的免疫特点使得水产养殖过程中抗病毒难度增大，防治手段匮乏。另外，各种消毒和防治药物的滥用也对环境和食品安全带来了极大的威胁。到目前为止，虽然在海洋无脊椎动物病害免疫防治方面有了长足的进步，但仍停留在非特异性增强机体抗病能力的方面，应对WSSV这类急性高致死性病毒感染时难以达到预期效果。因而，寻找高效环保的WSSV防治手段对病毒学研究及水产养殖业的可持续发展均具有重要的意义。

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)诱发的同源mRNA高效特异性降解的现象。藉由这种高效的特异性降解作用。近年来，越来越多的研究证明RNA干扰技术不仅可以应用于细胞和植物水平，在水生无脊椎动物中有着同样的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种wsv049的siRNA在制备白斑综合症病毒制剂的应用，通过利用wsv049-siRNA干扰病毒复制相关基因wsv049的表达，达到抑制WSSV增殖的目标，以解决WSSV对海水和淡水养殖虾类感染并致死的现象等问题。

一种能抑制WSSV的wsv049的siRNA，序列为：

正义链：5'-CUGGAAGAAAGUCUUCAAUCAGAUU-3’

反义链：5'-UCUGAUUGAAGACUUUCUUCCAGUU-3’。

上述能抑制WSSV的wsv049的siRNA的制备方法，主要包括以下步骤：

(1)选取已验证的与WSSV早期复制相关的编码基因；

(2)对干扰位点进行预测；

(3)按照siRNA设计原则针对干扰位点设计最适wsv049-siRNA；

(4)合成双链wsv049-siRNA分子。