[发明专利]一种植物绿色秸秆快速腐解并防控烤烟根结线虫病的方法

权利要求书

1.一种植物绿色秸秆快速腐解并防控烤烟作物根结线虫病的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将油萝卜植株绿色秸秆割断为30-40cm/节；

(2)将四种腐解菌剂枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、绿色木霉和黑曲霉按质量比为1-2∶0.5-1.5∶1.5-2∶0.5-2的比例混匀，每种菌的终浓度(孢子量)均调配为3×10⁹CFU/ml，制备成悬浮剂，经过滤或过筛制备成混合菌剂母液；

(3)将上步得到的混合菌剂母液按照混合菌剂母液与水的质量比为1∶20-1∶50的比例与水混合均匀，得到腐解菌剂悬浮剂，此时腐解菌剂悬浮剂中孢子浓度为10⁸CFU/ml；

(4)将上步调配的腐解菌剂悬浮剂喷施至第一步割倒于田间的油萝卜绿色秸秆上，并将喷施腐解菌剂悬浮剂的油萝卜绿色秸秆就地翻埋腐解60天以上；

(5)移栽作物幼苗前，再次翻犁种植地，按所种植作物的需求平整栽培地和完成其它农事操作。

2.根据权利要求1所述的植物绿色秸秆快速腐解并防控烤烟作物根结线虫病的方法，其特征在于，所述方法在2-4月份进行。

3.根据权利要求1所述的植物绿色秸秆快速腐解并防控烤烟作物根结线虫病的方法，其特征在于，第(2)步中四种腐解菌剂枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、绿色木霉和黑曲霉按质量比为1∶1∶1∶1的比例混匀。

4.根据权利要求1所述的植物绿色秸秆快速腐解并防控烤烟作物根结线虫病的方法，其特征在于，第(3)步中，混合菌剂母液与水的质量比为1∶30。

5.根据权利要求1所述的植物绿色秸秆快速腐解并防控烤烟作物根结线虫病的方法，其特征在于，第(1)步中所述的油萝卜植株绿色秸秆选取油萝卜生长至盛花期的秸秆。

6.根据权利要求1所述的植物绿色秸秆快速腐解并防控烤烟作物根结线虫病的方法，其特征在于，第(4)步中，一亩油萝卜秸秆上，腐解菌剂悬浮剂的喷施量为20-40kg。

7.根据权利要求1所述的植物绿色秸秆快速腐解并防控烤烟作物根结线虫病的方法，其特征在于，四种腐解菌剂中的细菌采用LB培养基发酵制备一级、二级种子和腐解菌剂，培养基配方为：酵母提取物0.5％，胰化蛋白胨1％，NaCl 1％。

8.根据权利要求1所述的植物绿色秸秆快速腐解并防控烤烟作物根结线虫病的方法，其特征在于，四种腐解菌剂中的真菌采用PDA培养基制备一级和二级种子，培养基配方为：新鲜马铃薯20％，蔗糖2％，培养基配制方法为：新鲜马铃薯去皮，加入5倍马铃薯质量的自来水，煮沸30min，用双层纱布过滤温度降至室温的马铃薯汁液，再用自来水溶洗马铃薯泥，过滤，收集的滤液总量为马铃薯质量的5倍，加入20％的蔗糖并溶解，分装马铃薯培养液前，按分装量的1.8％加入琼脂粉于三角瓶中，培养液分装至500mL或1000mL的三角瓶中，封口，121℃灭菌20min。

9.根据权利要求8所述的植物绿色秸秆快速腐解并防控烤烟作物根结线虫病的方法，其特征在于，真菌腐解菌剂的制备方法为：取低温保存的斜面试管或甘油管的两种细菌保存管，在无菌条件下，将保存的菌株分别接种至制备的固体PDA培养基试管中斜面上，置于25℃培养箱中培养72hr制备成一级种；

分别取上述培养的试管斜面和灭菌水，在无菌条件下，加入灭菌水，用接种铲刮洗斜面上的菌苔，通过无菌操作，依次刮取斜面上的菌苔，两种菌苔液分别收集于灭菌的空三角瓶中，混匀孢子液，用移液管吸取4mL的孢子液，加入制备的直径为15cm的PDA平板中，用涂布铲涂匀，两种真菌各制备10皿，置于25℃培养箱中持续培养7d，直至平板内PDA培养基上长满菌苔，黑曲霉的菌苔完全变黑，绿色木霉的菌苔完全变绿，制得二级种子。

10.根据权利要求9所述的植物绿色秸秆快速腐解并防控烤烟作物根结线虫病的方法，其特征在于，真菌腐解菌剂三级种的培养基配方为：1％蔗糖，2％谷壳，0.2％的(NH₄)₂SO₄；真菌腐解菌剂三级种培养基配置方法为：选用破碎玉米细粒，直径1-2mm，按玉米：水＝1:1.0-1.2的比例，加入自来水，浸泡24hr，滤去多余水分，然后按配方比例加入蔗糖、谷壳和(NH₄)₂SO₄，拌匀，用聚丙烯塑料袋包装为5kg/袋，121℃灭菌20min；

真菌腐解菌剂三级种的制备方法为：取制备好的两种真菌的二级种子，将平皿中两种菌与PDA培养基分别装入灭过菌的器皿中，用灭菌铁铲将其分别捣碎，取10个4×38×52cm的搪瓷盘，洗净，将灭菌的玉米粒培养基分为两份，称其重量，按5％的接种量加入上述制备的二级种子孢子与培养基，分别拌匀，取接种后的玉米粒培养基，按2kg/盘的量加入搪瓷盘中，铺平，置于恒温培养箱中培养，培养基质温度超过50℃时，取出曲盘，翻曲，使两种菌的菌丝在玉米粒培养基均匀生长，并产生大量孢子，25℃持续培养15天，制备成腐解菌剂三级种子。