[发明专利]去除宏基因组中宿主DNA的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种去除宏基因组中宿主DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

DNA片段化：将宿主基因组DNA进行片段化处理，得到宿主DNA片段；

氨基化：对上述宿主DNA片段进行氨基化处理；

偶联磁珠：将上述经氨基化处理的宿主DNA片段与磁珠偶联，得捕获磁珠；

杂交捕获：将待测样本采用上述方法进行DNA片段化，加入上述制备得到的捕获磁珠，进行杂交反应，磁力吸附磁珠，转移上清液，即得去除宿主DNA的待测宏基因组样本。

2.根据权利要求1所述的去除宏基因组中宿主DNA的方法，其特征在于，所述宿主的物种为人。

3.根据权利要求1所述的去除宏基因组中宿主DNA的方法，其特征在于，所述DNA片段化步骤中，所述宿主DNA片段的大小为150-300bp。

4.根据权利要求3所述的去除宏基因组中宿主DNA的方法，其特征在于，所述宿主基因组DNA片段化步骤中，采用超声破碎进行片段化处理，所述超声破碎的参数为：峰值功率为30-70W，脉冲占空系数为15.0-25.0，循环数为150-250，时间为200-400s；所述超声破碎的次数为1-3次。

5.根据权利要求1所述的去除宏基因组中宿主DNA的方法，其特征在于，所述氨基化步骤中，将所述宿主DNA片段与Premix Taq^TM试剂反应。

6.根据权利要求5所述的去除宏基因组中宿主DNA的方法，其特征在于，将所述宿主DNA片段与Premix Taq^TM试剂按照体积比为1:0.8-1.2混匀，70-74℃反应5-20min。

7.根据权利要求1所述的去除宏基因组中宿主DNA的方法，其特征在于，所述偶联磁珠步骤中，依次包括以下步骤：磁珠活化、磁珠偶联和双链变性；

所述磁珠活化步骤中，取羧基磁珠，加入一水合2-(N-吗啉代)乙烷磺酸洗涤，磁力吸附后去除上清，再加入乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺盐酸和N-羟基丁二酰亚胺，震荡活化，即得；

所述磁珠偶联步骤中，往活化后的磁珠加入经氨基化处理的宿主DNA片段，偶联反应，磁力吸附磁珠，去除上清液，重悬后封闭，即得；

所述双链变性步骤中，取上述偶联后的磁珠，加热使偶联于磁珠上的DNA双链变性，随后立即冷却，磁力吸附磁珠，去除上清液，洗涤，重悬，即得所述捕获磁珠。

8.根据权利要求7所述的去除宏基因组中宿主DNA的方法，其特征在于，所述磁珠偶联步骤中，以阻断试剂溶液重悬保存偶联后磁珠，备用；

所述双链变性步骤中，以阻断试剂溶液洗涤、重悬偶联后磁珠；

所述阻断试剂溶液含有：30-70mM的氯化钾，10-30mM的Tris-HCl，5-25mM的硫酸镁，50-200μg/ml的BSA。

9.根据权利要求1所述的去除宏基因组中宿主DNA的方法，其特征在于，所述杂交捕获步骤中，所述杂交反应的条件为：95℃加热3-5min，40-70℃加热1-3min。

10.根据权利要求1所述的去除宏基因组中宿主DNA的方法，其特征在于，所述杂交捕获步骤中，所述杂交反应中，还按照50-50μl阻断剂溶液/0.1-1mg捕获磁珠的量加入阻断试剂溶液，进行杂交反应；

所述阻断试剂溶液含有：30-70mM的氯化钾，10-30mM的Tris-HCl，5-25mM的硫酸镁，50-200μg/ml的BSA。

11.权利要求1-10任一项所述的去除宏基因组中宿主DNA的方法在制备检测宏基因组的试剂盒中的应用。

12.一种检测宏基因组的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-10任一项所述的捕获磁珠。

13.根据权利要求12所述的检测宏基因组的试剂盒，其特征在于，还包括阻断试剂，所述阻断试剂包括：摩尔比为4-6:1.5-2.5:0.7-1.3的氯化钾：Tris-HCl：硫酸镁，以及工作浓度为100μg/ml的BSA。