[发明专利]一种多指标联合检测标志性蛋白纸芯片

说明书

本发明涉及一种多指标联合检测标志性蛋白纸芯片，属于疾病检测技术领域。纸芯片分为两部分：检测通道区和吸水区。检测通道区通过在硝酸纤维素膜上喷蜡打印矩形蜡区分隔出相邻蜡区之间的亲水性检测通道。检测通道分样品区、反应区及显色区，为检测反应的场所。吸水区通过吸水滤纸与检测区部分重叠，提供层析动力并吸收多余反应物。样品中的标志性蛋白通过层析至反应区，与胶体金包被的特异抗体结合；显色区将检测结果以肉眼可见的红色条带方式呈现，使得纸芯片能适用于日常家庭诊断。本发明具有较高准确率，为疾病相关标志性蛋白的联合检测提供了一种简单快速的工具。

技术领域

本发明属于疾病检测领域，是基于胶体金技术及喷蜡打印制备微流控纸芯片技术，设计用于联合检测两种以上标志性蛋白的家庭用诊断装置。

背景技术

对于肿瘤标志物等标志性蛋白指标的检测，传统方法如酶联免疫吸附试验，存在检测步骤繁琐且耗时较长；每次仅能检测一种指标，导致特异性不强，假阳性率较高；最终显示检测结果需要借助一定的分析设备，从而限制了其适用场所。针对这些缺点，本发明提出一种结合喷蜡打印制备微流控纸芯片通道及胶体金标记特异性抗体的多指标联合检测纸质微流控芯片(简称纸芯片)，具有以下优点：1、使用纸质基材有效降低成本；2、通过设计合理的通道整合两个及以上检测指标，提高检测效率并降低假阳性；3、利用纸质的毛细作用驱动液体流动并发生反应，操作简单。4，使用免疫胶体金技术作为示踪物，可以实现检测结果的肉眼可见，无需专用分析设备。

发明内容

本发明提供了一种多指标联合检测标志性蛋白纸芯片。以硝酸纤维素膜和滤纸作为基材构建纸质微流控芯片，结合胶体金免疫示踪法实现肉眼检测，用于两种及以上标志性蛋白指标的联合检测，适用于日常家庭诊断。

本发明的技术方案：

一种多指标联合检测标志性蛋白纸芯片，所述的多指标联合检测标志性蛋白纸芯片包括两部分：检测通道区1和吸水区2；其中检测通道区1的基材为硝酸纤维素膜，吸水区2基材为吸水性滤纸；

检测通道区1包括N条矩形的蜡区3以及由蜡区3形成的亲水性的检测通道4；每个检测通道4分为样品区I、反应区II、显色区III三部分；样品区I用来施加样品液体；反应区II包被有针对标志性蛋白的胶体金标记A抗体；显色区III含检测线6和对照线7，二者的宽度与检测通道4一致，其中检测线6包被针对标志性蛋白的B抗体，对照线7靠近吸水区2一侧，且包被针对A抗体的二抗；

检测通道区1的显色区III与吸水区2滤纸相连，滤纸置于硝酸纤维素膜上层，两者重叠2mm，且共同粘附在聚氯乙烯底板5上。

所述的样品区I需要使用喷涂预处理液a进行喷涂处理，之后干燥15分钟，防止由于样品过酸或过碱的pH对实验结果造成影响；其中预处理液a为含2％牛血清白蛋白、0.5％Tween-20，pH为7.8的Tris-HCL缓冲液。

所述的反应区II包被前需要使用喷涂预处理液b进行喷涂处理，之后干燥 15分钟，以提高胶体金标记A抗体的释放效率；预处理液b为含有3％蔗糖、2％牛血清白蛋白、0.5％Tween-20，pH为7.6的Tris-HCL缓冲液。

所述的蜡区3由喷蜡打印机打印而成，打印蜡区3后的硝酸纤维素膜需要置于加热板上120℃下加热3分钟，至蜡融化后形成疏水屏障。

本发明的有益效果：(1)本发明将喷蜡打印法与胶体金技术相结合，能够联合多种标志性蛋白检测提高准确率，同时实现检测结果的肉眼可见，适用于家庭诊断。(2)与传统胶体金试纸相比，将样品垫、金标垫也集中到硝酸纤维素膜上，从而简化了装置的生产组装过程。(3)依照不同的标志性蛋白种类数，可以扩展相应的检测通道数。

附图说明

图1是纸芯片组装结构示意图。

图2是纸芯片内部结构示意图。

图3是检测结果示意图。