[发明专利]一种阻断鸡PD-1/PD-L1信号通路的表位多肽及其应用

说明书

本发明公开了一种阻断鸡PD‑1/PD‑L1信号通路的表位多肽及其应用，所述多肽的氨基酸序列为：SGFYYCGLITFSRSLKVVESSHS。本发明公开了一条能有效阻断PD‑1/PD‑L1信号通路的表位多肽，并对鸡免疫抑制状态下阻断PD‑1/PD‑L1信号通路后机体免疫抑制情况的恢复和逆转情况进行研究。本发明通过研究多肽与IBDV感染鸡PBMCs结合能力，进而研究多肽作用后T淋巴细胞增殖抑制的恢复作用，以及免疫调节相关细胞因子IL‑2、IL‑6及IFN‑γ等的基因表达情况，使得PD‑1/PD‑L1信号通路的激活而导致的免疫抑制成为免疫治疗临床应用的潜力靶点，并为多肽作为一种新的免疫检查点的阻断抑制剂提供理论依据，为获得提高免疫效应的多肽药物以及免疫佐剂疫苗奠定理论基础。

技术领域

本发明涉及阻断鸡PD-1/PD-L1信号通路的表位多肽及其应用，属于分子病理学与免疫学技术领域。

背景技术

程序性死亡因子(programmed death-1，PD-1或CD279)是T细胞表面一种抑制性受体，作为免疫应答的负调节物在中枢和外周免疫反应中发挥着关键作用。PD-1有两个配体PD-Ls(Ligand of Programmed-1)分别为PD-L1和PD-L2，相比较于PD-L1，PD-L2表达更受限制，但PD-L2对PD-1具有更高的亲和力。已经证明，表达PD-1的T细胞接触表达其配体PD-L1或PD-L2的细胞时，PD-1/PD-Ls信号通路激活，抑制响应抗原刺激的T细胞受体的激活信号功能，包括增殖，细胞因子分泌和细胞毒性降低。PD-1/PD-L1是重要的免疫负调节信号通路，作为T细胞免疫反应的协同刺激信号，其在机体适应性免疫中发挥着重要的负调节作用。

PD-1及其配体相互作用在感染或肿瘤消退期间或在自身耐受性发展期间下调免疫应答。慢性抗原刺激，例如在肿瘤疾病或慢性感染期间发生的刺激，导致T细胞表达PD-1水平升高。已经证明肿瘤发生和病毒持续性感染可以引起机体T细胞免疫抑制性受体PD-1及其配体PD-Ls的表达量变化，进而激活PD-1/PD-L1信号通路，致使细胞毒性T细胞活性下调，抑制细胞的增殖活性，影响各免疫细胞的程序性死亡等免疫反应，继而在中枢免疫和外周免疫反应中传递免疫耐受和免疫抑制信号，引发机体的免疫抑制和病毒持续性感染。阻断该通路后可以有效的恢复或逆转由于病毒感染或某些疾病引发的T细胞免疫功能耗竭或抑制，为提高免疫水平和免疫抑制性疾病提供新的思路和方法。

在慢性感染系统中发现，阻断PD-1/PD-L1相互作用可以增强T细胞活性。慢性淋巴细胞性绒毛膜脑膜炎病毒感染小鼠发现，通过阻断PD-1/PD-L1也表现出病毒清除率的改善和免疫力的恢复。此外，在慢性病毒感染期间通过阻断PD-1/PD-L1可以恢复功能疲惫的CD8⁺T细胞。通过PD-L1的单克隆抗体阻断PD-1/PD-L1可以恢复HIV患者，HCV患者或HBV患者的T细胞体外抗原特异性功能。除了增强对慢性抗原的免疫应答外，还显示阻断PD-1/PD-L1途径可增强对疫苗接种的反应，包括在慢性感染的情况下进行治疗性疫苗接种。通过靶向PD-L1蛋白阻断PD-1/PD-L1相互作用已被证明可在体外和体内恢复抗原特异性T细胞免疫功能，包括在肿瘤或慢性感染的情况下对疫苗接种的增强反应。因此，需要阻断PD-L1与PD-1相互作用的试剂。

目前国内外科研机构及制药公司开展了大量关于治疗性PD-1及其配体PD-L1的单克隆抗体开发工作，一些药物已经进入临床研究阶段。大量动物实验和体外实验研究结果表明，利用特异性单克隆抗体对PD-1及其配体的相互结合进行封闭，免疫功能耗竭的T细胞功能得到了有效的恢复和逆转，包括抗炎症及病毒类细胞因子的分泌、细胞毒性T细胞杀伤能力、免疫细胞增殖活性、CTL反应活性、抗体分泌能力等，加速了体内病原的清除。因此，这使得PD-1及其配体介导的信号通路成为免疫治疗临床应用的潜力靶点。但是抗体药物有很多不利因素，比如生产成本高，稳定性、免疫原性，以及在原发性耐药和继发性耐药成为主要障碍。因此，针对PD-1/PD-L1小分子抑制剂被引入，小分子抑制剂在动力学以及稳定性方面提供固有的优势。并为多肽作为一种新的免疫检查点的阻断抑制剂提供理论依据。而目前多肽作为阻断制剂的相关信息还鲜有报道。