[发明专利]一种嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法

权利要求书

1.一种嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法，其特征在于，包括：

配制嵌段聚合物胶束：二硫代二丙酸经活化剂活化羧基后与透明质酸发生反应制得中间体，所述中间体经活化剂活化羧基后与聚乳酸-羟基乙酸发生反应制得嵌段聚合物，将嵌段聚合物溶于去离子水，制得嵌段聚合物胶束溶液；

配制脂肪酶酶液：将一定量的脂肪酶粉溶于pH＝8.0的磷酸缓冲盐溶液中，5℃下搅拌均匀后，以转速为12000r/min高速离心3min，将上清液转移到容量瓶中，用pH＝8.0的缓冲溶液定容后，得到酶促合成氰氟草酯脂肪酶；

脂肪酶的固定化：将聚合物胶束溶液与酶促合成氰氟草酯脂肪酶混合，抽滤后加入去离子水溶解，并用pH＝8.0磷酸盐缓冲液洗至去除多余的脂肪酶，定容到1L的pH＝8.0磷酸盐缓冲液，冷冻干燥得到嵌段聚合物胶束固定化的脂肪酶。

2.根据权利要求1所述的嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述透明质酸与二硫代二丙酸的质量比1:2-4，所述活化剂与二硫代二丙酸的摩尔比0.8-1.2:1。

3.根据权利要求1所述的嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法，其特征在于，制备所述中间体的反应温度为30-45℃，反应时间为10-16h。

4.根据权利要求1所述的嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述配制嵌段聚合物胶束的反应溶剂选自水、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、甲醇、氯仿和丙酮中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述活化剂选自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基丁二酰亚胺、二环己基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶中的一种或几种。

6.根据权利要求1所述的嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述聚合物胶束的结构式为：

其中，n＝10-30，m＝200-210。

7.根据权利要求1所述的嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述的脂肪酶是从动物、植物或微生物中提取的一种。

8.根据权利要求1所述的嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述酶促合成氰氟草酯脂肪酶的活性为512U/g，加酶量为10mg/g。

9.根据权利要求1所述的嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述脂肪酶的固定化时间为24h，固定化温度为28℃，固定化pH为8.0。

10.一种氰氟草酯的合成方法，其特征在于，以底物1、底物2为原料，以权利要求1-9任一项所述的嵌段聚合物胶束固定化脂肪酶为酶催化剂，经酶促酯交换合成氰氟草酯，所述底物1为(R)-2-[4-(4-氰基-2-氟苯氧基)苯氧基]丙酸乙酯，所述底物2选自正丁醇、乙酸正丁酯、丙烯酸正丁酯、甲基丙烯酸正丁酯、硬脂酸正丁酯、肉桂酸正丁酯中的一种，反应方程式如下：