[发明专利]一种人卵母细胞体外成熟培养液及其制备方法和培养方法

权利要求书

1.一种人卵母细胞体外成熟培养液，其特征在于：其配方以质量份数计由以下组分制成：75IU/L rFSH 70-95份，150IU/L rHCG 60-70份，20% SPS 50-55份，2mg/L EGF 30-40份，25mmol/L丙酮酸钠 20-25份和基本细胞培养液Qiunn’s 1029 150-200份。

2.根据权利要求1所述的一种人卵母细胞体外成熟培养液的制备方法，其特征在于：其制备方法如以下步骤：

S1，首先将基本细胞培养液Qiunn’s 1029放入反应釜内部，并加入75IU/L rFSH 和150IU/L rHCG，之后启动反应釜，使其进行充分混合，之后放置30分钟使其充分融合；

S2，依次将20%SPS、2mg/L EGF和25mmol/L丙酮酸钠依次加入反应釜内部，并同时启动反应釜，温度保持在5℃，混合30分钟使其进行充分混匀；

S3，将步骤S2中得到的半成品放入医用冰箱内部，冰箱内部温度保持在2-8℃，制备完成。

3.根据权利要求1所述的一种人卵母细胞体外成熟培养液的培养方法，其特征在于：其培养方法包括以下步骤：

S1，在患者取卵前一日，将人卵母细胞体外成熟培养液放入恒温培养箱内部平衡16-18小时；

S2，患者取卵日用滑动法辨认和拾捡卵泡液中的未成熟卵母细胞，常规HEPE’s人输卵管液冲洗后倒置显微镜下观察，未排出第一极体的MI期卵母细胞和卵胞浆内仍然可见生发泡的GV期卵母细胞为未成熟卵母细胞，再次使用人卵母细胞体外成熟培养液将其冲洗，随后将人未成熟卵母细胞放入人卵母细胞体外成熟培养液1mL中，恒温培养箱内5%O₂、5%CO₂、37℃条件下进行培养26-28小时；

S3，将步骤S2中完成培养的人卵母细胞取出，酶消化后剥卵针将人卵母细胞体周围的卵丘细胞剥除；

S4，最后将步骤S3剥除完成的人卵母细胞体放在倒置显微镜下，进一步观察和确认卵母细胞的成熟情况，以卵母细胞排出第一极体，成为MII期卵母细胞为卵子成熟的标志。