[发明专利]肺癌肿瘤干细胞的制备方法及应用

说明书

本发明公开了肺癌肿瘤干细胞的制备方法及应用。本发明提供的肺腺癌肿瘤干细胞的制备方法包括：1)从肺腺癌细胞中分离得到表达ALDH1、CD44和/或CD166的细胞；2)从表达ALDH1、CD44和/或CD166的细胞中继续分离得到表达ALDH1、CD44和/或CD166的细胞，即得到肺腺癌肿瘤干细胞；3)将肺腺癌肿瘤干细胞进行三维细胞培养，即获得目的肺腺癌肿瘤干细胞。本发明的肺腺癌肿瘤干细胞的制备方法可成功得到高比例的肺腺癌肿瘤干细胞，且所得肺腺癌肿瘤干细胞稳定性强，增殖快，较肿瘤干性强，均一性强。

技术领域

本发明涉及生物医学领域中，肺癌肿瘤干细胞的制备方法及应用。

背景技术

2001年Colin R Goding正式提出了肿瘤干细胞的概念，肿瘤干细胞是一群具有自我更新能力、多分化潜能和高增殖能力的细胞，肿瘤干细胞还具有耐药性。正因其多药耐药的特性可导致肿瘤的治疗失败。虽然在肿瘤内的任何一个特定的时刻都可能出现细胞分化、增殖或侵袭表型，但表型转换能力意味着大多数细胞具有干细胞类似的特性。

近年肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)学说也越来越备受人们关注和研究，认为肿瘤是干细胞产生的，肿瘤的生长是由于肿瘤中极少量肿瘤干细胞不断增殖的结果，只有消灭这一小群肿瘤干细胞，才可能更好的治愈癌症。由此，该学说在对传统的肿瘤治疗方法(包括手术治疗，化学药物治疗，放射治疗等)提出严峻的考验，同时也为肿瘤的治疗提供了一种新的思路。更好的找到肿瘤干细胞并理解肿瘤干细胞的特性，将对癌症的治疗方案提供了更为可靠和重要的理论依据。

然而，目前肿瘤干细胞在肿瘤组织中所占的比率很低，要找出这群特异的肿瘤干细胞并对其进行深入研究和治疗更是难上加难，因此，如何分离肿瘤干细胞并对其进行体外培养是目前亟待解决的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何制备肺癌中肺腺癌肿瘤干细胞。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了肺腺癌肿瘤干细胞的制备方法，所述方法包括：

1)从肺腺癌细胞中分离得到表达ALDH1、CD44和/或CD166的细胞；

2)从所述表达ALDH1、CD44和/或CD166的细胞中继续分离得到表达ALDH1、CD44和/或CD166的细胞，即得到肺腺癌肿瘤干细胞；

3)将所述肺腺癌肿瘤干细胞进行三维细胞培养，即得到目的肺腺癌肿瘤干细胞。

所述表达ALDH1、CD44和/或CD166的细胞可为表达ALDH1的细胞或表达CD44和CD166的细胞。

上述方法中，步骤1)和步骤2)中细胞的分离均可通过流式细胞仪分选完成。

在实际应用中，可根据具体情况重复步骤2)，重复次数各根据具体需要确定。

上述方法中，步骤3)中所述三维细胞培养可利用肿瘤干细胞3D培养体系培养，所述肿瘤干细胞3D培养体系由肿瘤干细胞培养基和基质胶组成，所述肿瘤干细胞培养基由溶剂和溶质组成，所述溶剂为DMEM/F12培养基，所述溶质及其在所述肿瘤干细胞培养基中的浓度分别为20ng/ml EGF，20ng/ml bFGF，5μg/mL insulin,2％(体积百分比)B-27^TMsupplement(50×)，1％(体积百分比)GlutaMAX^TM supplement(100×)，5μM Y-27632Rock抑制剂，10mmol/L HEPES。

所述B-27^TM supplement(50×)可为GIBCO公司产品，货号为12587010。

所述GlutaMAX^TM supplement(100×)可为Gibco公司产品，货号为35050061。