[发明专利]circ-CCNB1作为胃癌和结直肠癌诊断生物标志物和治疗靶点的应用

说明书

本发明公开了环状RNA CCNB1(circ‑CCNB1)作为一种新的潜在的胃癌和结直肠癌诊断生物标志物和治疗靶点的应用。circ‑CCNB1(hsa_circ_0001495|chr5：68470703‑68471364+|CCNB1)是由CCNB1基因第6‑7号外显子反向剪接所形成，环化序列有378个碱基。本发明制备了circ‑CCNB1的qRT‑PCR引物以及体外干扰circ‑CCNB1的小干扰RNA(siRNA)。与正常对照相比，circ‑CCNB1在胃癌和结直肠癌病人肿瘤和血浆样本中表达均显著上调。体外实验显示circ‑CCNB1在胃癌和结直肠癌细胞中发挥促癌基因的作用。本发明研究结果表明circ‑CCNB1是一种新的潜在的胃癌和结直肠癌诊断生物标志物和治疗靶点。

技术领域

本发明属于医学技术领域，涉及一种环状RNA CCNB1作为胃癌和结直肠癌诊断生物标志物和治疗靶点的应用。

背景技术

胃肠道肿瘤是最常见和最主要的肿瘤类型，包括胃癌、结肠癌和直肠癌等。根据2018年最新的全球癌症统计报告，在所有恶性肿瘤中，胃癌死亡率位居全球第三，发病率位居全球第五：结直肠癌死亡率位居全球第二，发病率位居全球第三。目前研究表明，胃癌的发生与地域环境及饮食生活因素、幽门螺杆菌感染、癌前病变，以及遗传和基因因素有关。大肠癌的发生与高脂肪低纤维素饮食、大肠慢性炎症、大肠腺瘤、遗传因素和其他因素(如环境因素、吸烟等)有关。关于胃肠道肿瘤的诊断和治疗取得了很大进展，但是其预后差仍是目前面临的严峻问题，如何寻找有效的诊断标志物及治疗靶点对于提高胃肠道肿瘤的预后将具有重要的科学意义和临床价值，可为胃肠道肿瘤的临床预防和治疗开辟新途径。

环状RNA(circular RNA/circRNA)是一大类共价结合形成环形结构的非编码RNA。环状RNA首先于1976年在植物病毒中发现，最初它被认为是一类错误剪接且没有研究意义的RNA。随后研究发现circRNA在生物体内对基因表达有重要的调控作用，其结构特点为具有闭合的环状结构，没有5’帽子端和3’尾端。这种环状结构是通过上游3’端剪接受体经反向剪接与下游5’端剪接供体连接形成。这种以共价键结合的环状闭合结构导致circRNA不受核酸外切酶影响，比线性RNA更加稳定。近年来研究发现circRNA具有以下基本功能：作为竞争性内源性RNA(ceRNA)吸附microRNA；调控转录及选择性剪接；作用于RNA结合蛋白；翻译成蛋白质。基于以上circRNA的功能，相关研究已经证实circRNA与人类疾病包括肿瘤密切相关。因此，深入研究circRNA在胃肠道肿瘤中的作用机制，对于胃肠道肿瘤的诊断及治疗具有潜在的巨大意义。

发明内容

本发明提供了circRNACCNB1(circ-CCNB1)在胃癌和结直肠癌诊断及治疗方面的应用。本发明公开了circ-CCNB1作为一种新的潜在的胃癌和结直肠癌诊断生物标志物和治疗靶点：circ-CCNB1在胃癌和结直肠癌病人的肿瘤和血浆样本中表达显著上调；受试者工作特征(ROC)曲线显示circ-CCNB1具备良好的诊断胃癌和结直肠癌的潜能；circ-CCNB1促进胃癌和结直肠癌细胞的增殖。

本发明的第一个目的是提供一种胃癌和结直肠癌潜在诊断生物标志物和治疗靶点，其为circ-CCNB1(hsa_circ_0001495|chr5：68470703-68471364+|CCNB1)(核苷酸序列如SEQ ID No.1所示)。circ-CCNB1是由CCNB1基因第6-7号外显子反向剪接所形成，环化序列有378个碱基。

本发明的第二个目的是提供特异性识别circ-CCNB1的引物对，包括上游引物和下游引物。上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；下游引物的核苷酸序列如SEQ IDNo.3所示。

本发明的第三个目的是公开circ-CCNB1在胃癌和结直肠癌病人肿瘤组织中的表达情况。

本发明的第四个目的是公开circ-CCNB1在胃癌和结直肠癌病人血浆中的表达情况，以及相应的评价circ-CCNB1诊断能力的ROC曲线。