[发明专利]一种基于磁珠法的快速、不加热的核酸提取试剂盒

说明书

本发明提供了一种基于磁珠法的快速、不加热的核酸提取试剂盒，含有磁珠的溶液，蛋白酶K；polyA溶液；去蛋白液；洗涤液液；洗脱液；裂解液。本发明还提供了采用上述的试剂盒对核酸进行提取的方法，先加入裂解液和磁珠到样品中，充分震荡混匀，在裂解细胞释放核酸的同时用磁珠捕获核酸，然后分别采用特有的去蛋白液和漂洗液洗涤去除磁珠表面的蛋白质和盐离子等杂质，最后用特有的洗脱液在室温快速洗脱核酸。与常规的磁珠法核酸提取试剂盒相比，本发明的试剂盒步骤简便、快速，整个流程下来仅需要15min左右，而且不需要加热，降低了可能因为气溶胶造成样品间污染的概率；无氯仿苯酚等有毒试剂，安全无污染。

技术领域

本发明属于生物工程领域，涉及一种试剂盒，具体来说是一种基于磁珠法的快速、不加热的核酸提取试剂盒。

背景技术

随着分子生物学的发展，对疾病相关病毒进行检测和分型是分子检测的一个重要应用领域，而从生物材料中高效、简便的提取纯化目的核酸是分子检测的关键技术。目前病毒核酸纯化主要分为三种，分别为煮沸法、醇类沉淀法、柱膜法和磁珠法。

煮沸法是在样品中加入裂解液，通过加热的方法裂解细胞释放核酸，该方法操作简便但是提取的核酸纯度低，通量低，不利于后续的检测，也容易造成污染。醇类沉淀法主要是利用变性剂和表面活性剂进行裂解，释放出核酸后用苯酚、氯仿进行抽提去除蛋白等杂质，然后用乙醇或异丙醇进行沉淀，去除上清后获得核酸沉淀，然后用TB或TE缓冲液进行溶解。该方法步骤繁琐，重复性差，耗时较长，约2h左右，并且使用了有剂试剂，不利于实验操作。柱膜法是用硅胶膜对核酸进行吸附和纯化，主要是用变性剂和表面活性剂裂解细胞，释放核酸分子，在低pH值、高盐以及醇的条件下结合核酸分子，然后用含有胍盐的乙醇溶液洗涤去除蛋白等杂质，用70％或80％的乙醇溶液去除盐离子，干燥去除残留乙醇后在高pH值、低盐的情况下洗脱核酸，该方法操作相对简便，耗时较短，约1h左右，提取的核酸纯度高，但是不利于自动化操作。近年，磁珠法病毒核酸提取广泛的应用，

磁珠法病毒核酸提取和柱膜法类似，主要是用磁性微球替代柱膜吸附核酸，该方法的优点是能够在仪器上进行操作，进行自动化操作，但是由于磁珠吸附核酸的同时也会吸附蛋白等杂质，所以对结合以及洗涤条件要求比较高，获得高纯度的核酸比较困难，这个实验流程耗时约1h。

病毒核酸的提取过程中，在裂解和洗脱的过程中加热利于核酸的释放和洗脱，提高提取的效率，但是加热容易造成基因的污染，在临床检验中容易造成假阳性的检测结果，同时对提取仪器的要求较高。

发明内容

针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种基于磁珠法的快速、不加热的核酸提取试剂盒，所述的这种基于磁珠法的快速、不加热的核酸提取试剂盒要解决现有技术中提取核酸的方法过程复杂，实验要求高，而且容易造成假阳性的技术问题。

本发明提供了一种基于磁珠法的快速、不加热的核酸提取试剂盒，包括如下试剂：

含有磁珠的溶液，所述的磁珠为硅基或硅羟基磁珠，所述的磁珠溶液的浓度为50-100mg/mL；

蛋白酶K，所述的蛋白酶K的浓度为50-100mg/mL；

polyA溶液，所述的polyA的浓度为10-50mM；

去蛋白液，所述的去蛋白液中含有终浓度为1-3M的盐酸胍，终浓度为10-20mM的Tris-HCl，Tris-HCl的pH7.0-8.0，质量百分比浓度为20-40％的无水乙醇；

洗涤液，所述的盐离子溶液中含有终浓度为10-50mM的Tris-HCl，Tris-HCl的pH8.0-9.0，质量百分比浓度为5-10％的PEG6000，200-500mM的Nacl溶液；

洗脱液，所述的洗脱液中含有5-20mM的Tris-HCl，Tris-HCl的pH8.0-9.0，质量百分比浓度为0.1-0.5％的Tween-20；