[发明专利]一种质粒载体对、其修饰的免疫细胞及其应用

权利要求书

1.质粒载体对，其包括第一载体和第二载体，其特征在于，所述第一载体包含Notch核心，还包括其他胞外段和胞内段的编码核酸分子，所述胞内段优选地含有转录激活因子；所述第二载体含有与所述第一载体中的胞内段特异性识别和结合的核酸分子以及编码IL12的核酸分子。

2.根据权利要求1所述的质粒载体对，其特征在于，所述第一载体的Notch核心具有SEQID NO:3所示的核酸序列；优选地，所述第一载体的胞内段为GAL4VP64，所述第二载体含有GAL4UAS。

3.权利要求1所述的质粒载体对，其中所述胞外段含有抗原或该抗原的抗体或其片段，或含有受体或该受体的配体。

4.权利要求1所述的质粒载体对，其特征在于，所述第一载体的胞外段能够特异性识别肿瘤抗原；优选地，所述肿瘤抗原为实体瘤抗原，所述肿瘤抗原选自前列腺特异性膜抗原(PSMA)、癌胚抗原(CEA)、IL13Ralpha、HER-2、CD19、NY-ESO-1、HIV-1Gag、Lewis Y、MART-1、gp100、酪氨酸酶、WT-I、hTERT、间皮素、EGFR、EGFRvIII、GPC3、EphA2、HER3、EpCAM、MUC1、MUC16、CLDN18.2、叶酸受体、CLDN6、CD30、CD138、ASGPR1、CDH16、GD2、5T4、8H9、αvβ6整合素、B细胞成熟抗原(BCMA)、B7-H3、B7-H6、CAIX、CA9、CD20、CD22、κ轻链(kappa light chain)、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD70、CD123、CD171、CSPG4、EGP2、EGP40、ERBB3、ERBB4、ErbB3/4、FAP、FAR、FBP、胚胎型AchR、GD2、GD3、HLA-AI MAGE A1、MAGE3、HLA-A2、IL11Ra、KDR、Lambda、MCSP、NCAM、NKG2D配体、PRAME、PSCA、PSC1、ROR1、Sp17、SURVIVIN、TAG72、TEM1、TEM8、VEGRR2、HMW-MAA、VEGF受体、和/或纤连蛋白、腱生蛋白或肿瘤坏死区的癌胚变体中的一种或多种，更优选地，所述肿瘤抗原为GPC3或CLDN18.2。

5.权利要求1的质粒载体对，其中所述胞外段含有scFv；优选anti-GPC3scFv。

6.权利要求1的质粒载体对，其中所述第一载体还包括标签，例如，C-myc，FLAG和/或HA。

7.权利要求1的质粒载体对，其中所述第二载体还包括报道子，例如，GFP，BFP和/或mcherry。

8.权利要求1的质粒载体对，其中所述第一载体的开放阅读框依序包括PGK启动子-信号肽-myc标签–anti-GPC3scFv-Notch核心-GAL4-接头-VP64，所述第二载体依序包括GAL4UAS-CMV minimal启动子-IL12-PGK启动子–mcherry。

9.权利要求1的质粒载体对，其中所述第一载体的开放阅读框的核苷酸序列含有如SEQID NO：21所示的序列，所述第二载体的开放阅读框的核苷酸序列含有如SEQ ID NO：22所示的序列。

10.权利要求1-9任一项所述的质粒载体对，其中所述第一载体或第二载体还包括各自的功能性变体，该变体的核苷酸序列分别与所述第一载体或第二载体的核苷酸序列具有至少50％，优选70％、75％、80％、85％或90％，更优选95％、96％、97％、98％或99％的同一性；优选地，anti-GPC3scFv具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列具有至少90％的同一性。

11.基因修饰的免疫细胞，其特征在于，所述细胞转染有权利要求1-10任一项的质粒载体对。