[发明专利]一种地被菊抗枯萎病品种的筛选方法

权利要求书

1.一种地被菊抗枯萎病品种的筛选方法，其特征在于：（1）采用离体叶片划伤接种法，在离体的地被菊叶片上接种尖孢镰刀菌和茄病镰刀菌，接种完后置于25℃光照培养箱中培养7天；然后对地被菊枯萎病进行病级划分，病情指数计算，筛选抗性品种；（2）以步骤（1）筛选出的抗性品种为原材料，以地被菊的脚芽为插穗，去掉下部叶片，保留顶部1-2片叶子，在浓度为1 g·L^-1生根粉溶液中浸泡15分钟；将脚芽扦插于基质中；待扦插的脚芽展叶8-10片后，采用伤根浸泡法进行人工接种尖孢镰刀菌和茄病镰刀菌，接种后调查发病情况，并对地被菊枯萎病进行病级划分，病情指数计算，筛选抗性品种；

步骤（1）中选取长势一致的地被菊扦插苗，分别自顶部向下摘取第3-5片叶，75%的酒精对叶片灭菌10秒，无菌水冲洗干净，划伤叶片主叶脉并依次摆放在铺有无菌滤纸的培养皿内；接种环蘸取尖孢镰刀菌和茄病镰刀菌的病菌孢子于叶片上，培养皿内注无菌水保湿；接种完成后密封置于25℃光照培养箱中培养7天，每日调查地被菊叶片的发病情况并记录；

地被菊离体叶片枯萎病的4个病害分级标准为：1级：叶片发黄且带有病斑，面积占整片叶面积的10%以下；2级：病斑面积占整个叶面积的10%-35%；3级：病斑面积占整个叶面积的36%-60% ；4级：病斑面积扩大占整个面积的61%以上；按如下公式进行病情指数计算：病情指数DI =∑[(各级病叶数×各级代表数值)/总调查叶数×最高级代表数值]×100；所述最高级代表数值为4；

地被菊抗性水平分为：高抗、抗、中抗、感病、高感；抗性评价标准按病情指数划分：高抗:0＜DI≤15；抗：15＜DI≤35；中抗:35＜DI≤52；感病:53＜DI≤75；高感:75＜DI；

步骤（2）中人工接种尖孢镰刀菌和茄病镰刀菌的具体方法为：尖孢镰刀菌和茄病镰刀菌制备成浓度为2.5×10⁷个/ml的孢子悬浮液，浸根处理30分钟，侵染处理后于第4天、8天、12天、16天、20天分别调查发病情况，并计算病情指数；伤根浸泡法地被菊枯萎病的5个分级标准：0级：叶片无任何枯萎症状；1级：底部叶片褪绿发黄1-2片；2级:叶片变黄褐色且萎蔫下垂不超过整株叶片数的1/2；3级：叶片枯萎1/2-3/4且生长受到抑制，部分植株茎杆呈红褐色；4级：全株严重萎蔫以致枯死；病情指数=∑[(各级病株数×各级代表数值)/调查株数×最高一级代表数值]×100%；所述最高一级代表数值为4；

抗性评价标准：抗性评价按病情指数划分，高抗:0＜DI≤15；抗：15＜DI≤35；中抗:35＜DI≤52；感病:53＜DI≤73；高感:74＜DI。