[发明专利]用于诊断粘多糖病Ⅱ型的生物标志物及其应用

说明书

本发明涉及一组用于诊断粘多糖病Ⅱ型的生物标志物及其应用，所述的生物标志物是尿液中的α1‑抗胰蛋白酶(alpha1‑antitrypsin，AAT)，Gm2激活剂(Gm2activator，GM2A)及脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶(lipocalin‑type prostaglandin D synthase，L‑PGDS)。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体而言，涉及用于诊断粘多糖病Ⅱ型的生物标志物及其应用。

背景技术

粘多糖病Ⅱ型(mucopolysaccharidosis typeⅡ，MPSⅡ)，即Hunter综合征，为我国报道最为常见的MPS类型，是由于溶酶体内艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(iduronate-2-sulfatase，IDS)缺陷，从而导致分解不完全的硫酸皮肤素(dermatin sulfate，DS)和硫酸类肝素(heparan sulfate，HS)在全身各组织和器官中累积的伴X隐性遗传的代谢性疾病。该病的临床表现为全身骨骼发育不良、面容粗陋、肝脾肿大等。重型患儿多于18-36个月时发病，青春期时死亡，预后十分不良。由于早期诊断，特别是对婴儿诊断的不及时，会造成患者的发育、神经、生理的不可逆改变^[1]。同时，该病的致病机制尚未得到完全阐明，阻碍了疾病治疗方法的探索。因此，亟需简单可靠的诊断方法辅助早期诊断，并为寻求新的治疗方法提供实验基础。

蛋白质组学研究不仅有助于寻找特异性分子标志物，也能为疾病机制的阐明提供理论根据。尿液蛋白约30％来源于血浆蛋白，包含多种生物标志，可以间接反映血浆蛋白的组成。采用尿液作为蛋白质组学的研究对象具有以下优点：首先尿液收集是非侵入性的，便于多次留取，适合以此作为监测疾病进展和疗效的反映；其次尿液中包含的小分子蛋白和多肽不需过多的处理步骤便可直接分析，避免了由蛋白水解所带来的变异性与复杂性，；并且尿液是一种稳定的样本，因其储存在膀胱的过程中已被蛋白水解酶水解完全，所以合理冻存后蛋白成分不会发生太大改变。因此，利用蛋白质组学技术来检测患者尿液中的疾病标志物具有较强的可操作性与可行性。

双向凝胶电泳(two dimensional gel electrophoresis，2-DE)是应用最为广泛的蛋白质复合物分离技术。第一向为等点聚焦电泳(isoelectric focusingelectrophoresis，IFE)，将蛋白质按等电点分离；第二向为聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)，将蛋白质按分子量大小分离。经过近40年的发展，2-DE仍然是蛋白质分析中的一项重要技术。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flightmass spectrometry，MALDI-TOF-MS)技术，将电离的样品从离子源转送到质量分析器，根据飞行时间得到其分子量。该方法的优势在于高通量和高灵敏度，因此适用于分析微量蛋白质。

发明内容

本发明通过2-DE联合MALDI-TOF-MS方法，研究尿液中与MPSⅡ型相关的差异蛋白，寻找该病的特异性分子标志物，为其早期诊断，监测预后及寻求新的治疗方法提供研究依据，并为探讨该病的发生机制提供实验基础。

本发明首先涉及一组蛋白标志物在制备区分健康人和粘多糖病Ⅱ型(mucopolysaccharidosis typeⅡ，MPSⅡ)患者的诊断试剂中的应用；

所述的蛋白标志物是：α1-抗胰蛋白酶(alpha1-antitrypsin，AAT)，Gm2激活剂(Gm2activator，GM2A)及脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶(lipocalin-typeprostaglandin D synthase，L-PGDS)；