[发明专利]MiR-125b-2-3p作为鉴别诊断肾癌亚型的分子标志物及其在肿瘤转移中的用途

权利要求书

1.一种鉴别诊断肾癌亚型的分子标志物，其特征是：所述的分子标志物为MiR-125b-2-3p，其具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；

SEQ ID No.1核苷酸序列为：>hsa-miR-125b-2-3p MIMAT0004603

UCACAAGUCAGGCUCUUGGGAC。

2.一种PCR引物，其特征在于，包括可特异性扩增权利要求1所述的肾癌亚型分子标志物MiR-125b-2-3p的上游引物和下游引物。

3.根据权利要求2所述的PCR引物，其特征在于：所述上游引物具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；SEQ ID NO.2核苷酸序列为：

miR-125b-2-3p 5'-TCACAAGTCAGGCTCTTGGGA-3'；

U6 5'-ACGCAAATTCGTGAAGCGTTC-3'。

4.一种基于鉴别诊断肾癌亚型的分子标志物MiR-125b-2-3p表达水平的检测方法，其特征在于：所述的检测方法为荧光定量PCR法；该检测方法所需材料包括：标准DNA模板、PCR反应液以及如权利要求2或3所述的PCR引物；所述检测方法的具体步骤如下：首先通过对该PCR引物的PCR产物测序，验证了引物扩增的特异性；其次研究RCC组织中MiR-125b-2-3p的表达水平：分析从医院收集RCC组织及配对的癌旁组织样本；选三对RCC组织及配对的癌旁组织样本进行MiRNA芯片分析，检测在RCC组织中差异表达的MiRNA；采用qRT-PCR法验证RCC组织及癌旁组织中miR-125b-2-3p的表达情况；最后研究MiR-125b-2-3p表达水平与RCC发生、发展之间的关系：分析MiR-125b-2-3p在RCC各亚型之间的表达差异；分析MiR-125b-2-3p表达对ccRCC患者预后的影响；分析MiR-125b-2-3p表达与ccRCC患者临床病理资料的联系。

5.如权利要求1所述的肾癌亚型分子标志物在制备诊断或检测肾癌亚型试剂或基因检测芯片中的应用。

6.如权利要求1所述的肾癌亚型分子标志物在研究肾透明细胞转移的影响中的应用，其特征在于：首先研究MiR-125b-2-3p对肾癌细胞体内、外增殖的影响；其次研究MiR-125b-2-3p对肾癌细胞体内、外迁移的影响。

7.如权利要求6所述的应用，其特征是：研究MiR-125b-2-3p对肾癌细胞体内、外增殖的影响，具体包括：(1) 培养人肾癌细胞系(Caki-1、ACHN、786-O和OS-RC-2)和肾上皮细胞HK-2，用qRT-PCR法检测肾癌细胞系和HK-2中MiR-125b-2-3p的原始表达水平；(2) 瞬时转染MiR-125b-2-3p 模拟物或抑制剂到肾癌细胞系，qRT-PCR法检验转染效率，MTS法检测细胞体外增殖；(3) 利用慢病毒系统构建稳定表达MiR-125b-2-3p的肾癌细胞系，裸鼠皮下成瘤实验检测细胞体内增殖。

8.如权利要求6所述的应用，其特征是：研究MiR-125b-2-3p对肾癌细胞体内、外迁移的影响，具体包括：(1) 瞬时转染MiR-125b-2-3p 模拟物或抑制剂到肾癌细胞系，划痕实验和Transwell实验研究miR-125b-2-3p对肾癌细胞体外迁移的影响；(2) 利用慢病毒系统构建稳定表达MiR-125b-2-3p的肾癌细胞系，裸鼠尾静脉注射实验检测细胞体内转移。

9.一种鉴别诊断肾癌亚型的诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求7或8所述的PCR引物。