[发明专利]脂肪肝细胞模型及其构建方法

说明书

本申请公开了一种脂肪肝细胞模型及其构建方法。该方法包括如下步骤：以人正常肝细胞为造模细胞进行培养；将处于对数生长期的人正常肝细胞消化，制成细胞悬液；调整细胞密度，接于孔板中，置于细胞培养箱培养；培养12‑36小时后，弃去细胞上清液，清洗，加入酒精和油酸进行孵育；孵育12‑36小时后，获得所述脂肪肝细胞模型。本申请解决了由于现有脂肪肝模型为酒精性脂肪肝模型或者非酒精性脂肪肝模型所造成的具有一定局限性，不利于筛选具有护肝效果的药物的技术问题。

技术领域

本申请涉及细胞模型构建技术领域，具体而言，涉及一种脂肪肝细胞模型及其构建方法。

背景技术

脂肪肝是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变，以脂肪分子在肝细胞中大量沉积为特征，是肝硬化、肝纤维化等病症的重要生化基础。近年来，脂肪性肝病的发病率在不断升高，且发病年龄日趋年轻化，成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病。

根据脂肪肝的成病原因，一般将其分为酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝两大类。酒精摄入会升高NADH/NAD⁺比值，导致脂肪代谢混乱，脂肪分子在肝细胞中大量合成和沉积，引起酒精性脂肪肝病变。而食源性因素使得肝脏甘油三酯的机械堆积、肝细胞脂质过氧化水平增高以及脂质相关炎症因子的异常表达，引起非酒精性脂肪肝病变。

现有技术中，研究人员分别建立酒精性脂肪肝模型和非酒精性脂肪肝模型来筛选相应的治疗药物。例如，研究人员利用Lieber-DeCali(LD)液体饲料诱导模型探讨酒精代谢酶ADH和ALDH在白藜芦醇改善大鼠慢性酒精性肝损伤中的机制；又如，研究人员观察黄连素对胆碱-蛋氨酸缺乏(MCD)模型小鼠肝组织巨噬细胞表型转化的作用。

当前，人们不仅摄入了更多的酒精，还更倾向于高糖高脂饮食，这使得人们面临着同时患酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝的风险。在这种情况下，现有技术中的酒精性脂肪肝模型和非酒精性脂肪肝模型均具有一定局限性，不利于筛选具有护肝效果的药物。

针对现有技术中的上述问题，目前尚未提出有效的解决方案。

发明内容

本申请的主要目的在于提供一种酒精性联合非酒精性脂肪肝细胞模型，以解决由于现有脂肪肝模型为酒精性脂肪肝模型或者非酒精性脂肪肝模型所造成的具有一定局限性，不利于筛选具有护肝效果的药物的技术问题。

为了实现上述目的，根据本申请的一个方面，提供了一种脂肪肝细胞模型的构建方法，包括以下步骤：以人正常肝细胞为造模细胞进行培养；将处于对数生长期的人正常肝细胞消化，制成细胞悬液；调整细胞密度，接于孔板中，置于细胞培养箱培养；培养12-36小时后，弃去细胞上清液，清洗，加入酒精和油酸进行孵育；孵育12-36小时后，获得所述脂肪肝细胞模型。

进一步地，所述培养为用RPMI1640培养基培养，并加入10％的胎牛血清及1％的青霉素-链霉素，放入温度为37℃，CO₂浓度为5％的培养箱中静置培养。

进一步地，所述消化为将处于对数生长期的人正常肝细胞弃去细胞上清液后，加入胰蛋白酶，降解细胞间蛋白质后弃去胰蛋白酶。

进一步地，所述制成细胞悬液为用移液枪吹打制成细胞悬液。

进一步地，调整细胞密度为5×10⁵-5×10⁶个/毫升。

进一步地，所述清洗是用HBSS清洗1-2次。

进一步地，所述酒精的浓度为10-30mL/L。

进一步地，所述油酸的浓度为100-200μmol/L。

进一步地，所述脂肪肝细胞为酒精性联合非酒精性脂肪肝细胞。

为了实现上述目的，根据本申请的另一方面，提供了一种脂肪肝细胞模型，由上述的脂肪肝细胞模型的构建方法制得。