[发明专利]一种DNA环化分子及其用途

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No. 37~40其中之一所示。

2.一种DNA成环体系，所述DNA成环体系包括如权利要求1所述的融合蛋白、靶向启动子的sgRNA和靶向增强子的sgRNA，

所述靶向启动子的sgRNA靶向基因TSS上游-100至-200bp区间；

和/或，所述靶向启动子的sgRNA具有gnnnnnnnnnnnnnnnnnnnNGG特征；

和/或，所述靶向启动子的sgRNA靶向HBB基因的启动子区域；

和/或，所述靶向增强子的sgRNA靶向β-globin的LCR区域的DHS2附近。

3.如权利要求2所述的DNA成环体系，其特征在于，所述靶向启动子的sgRNA的序列如SEQ ID NO. 4~6所示。

4. 如权利要求2所述的DNA成环体系，其特征在于，所述靶向增强子的sgRNA的序列如SEQ ID NO. 7~9所示。

5.一种分离的多核苷酸，编码如权利要求1所述的融合蛋白。

6.一种表达系统，所述表达系统包括能够表达如权利要求1所述融合蛋白、权利要求2所述靶向启动子的sgRNA和靶向增强子的sgRNA的宿主细胞。

7.如权利要求6所述的表达系统，其特征在于，所述宿主细胞选自真核细胞。

8.如权利要求6所述的表达系统，其特征在于，所述宿主细胞选自后生动物来源的原代细胞或永生化细胞系。

9.如权利要求6所述的表达系统，其特征在于，所述宿主细胞为血系细胞系。

10.如权利要求8所述的表达系统，其特征在于，所述宿主细胞为人K562细胞。

11.如权利要求2~4任一权利要求所述的DNA成环体系、如权利要求5所述的多核苷酸、或如权利要求6~10任一权利要求所述的表达系统在调控基因表达中以非疾病治疗目的的应用。

12.如权利要求11所述的应用，其特征在于，所述基因表达为真核生物基因表达。

13.如权利要求12所述的应用，其特征在于，所述真核生物为后生生物。

14.如权利要求12所述的应用，其特征在于，所述真核生物为人、小鼠、线虫、果蝇中的一种或多种的组合。

15.一种以非疾病治疗目的调控基因表达的方法，包括：通过如权利要求2~4任一权利要求所述的成环体系，拉近靶向位点的三维空间距离，进行基因表达的调控。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述调控基因表达的方法包括：在所述成环体系存在的条件下，在适当条件下培养能够表达目标基因的宿主细胞；

和/或，所述调控基因表达方法为调控体外基因表达方法。