[发明专利]一种黄酮类小分子黄芩苷完全抗原的制备方法在审
申请号: | 201910064509.5 | 申请日: | 2019-01-23 |
公开(公告)号: | CN109912711A | 公开(公告)日: | 2019-06-21 |
发明(设计)人: | 吴小平 | 申请(专利权)人: | 北京测尔康生物技术有限公司 |
主分类号: | C07K14/765 | 分类号: | C07K14/765 |
代理公司: | 北京联瑞联丰知识产权代理事务所(普通合伙) 11411 | 代理人: | 张清彦 |
地址: | 102200 北京市昌平区*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 完全抗原 黄芩苷 黄酮类 小分子 取上清液 透析 制备 多克隆抗体制备 二甲基甲酰胺 单克隆抗体 复合碳酸盐 缓冲溶液 免疫试验 透析液体 盐缓冲液 离心管 透析袋 亚酰胺 磷酸 分装 碳二 无水 装入 离子 中药材 溶解 合成 筛选 保存 | ||
1.一种黄酮类小分子黄芩苷完全抗原的制备方法,其特征在于包括下述步骤:
(1)取黄酮类小分子黄芩苷40-50mg,溶解于1000μL无水N,N-二甲基甲酰胺中;
(2)依次加入10-15mg碳二亚酰胺和15-25mgEDC-HCl,室温下反应15-20h,离心3-8min,取上清液待用;
(3)取上清液加入7-10ml复合碳酸盐缓冲溶液,每次加入25μl,直到加完为止,室温下搅拌3-5h;
(4)将反应液装入透析袋,用pH值为7-8、离子浓度为0.01-0.03mol/L磷酸性盐缓冲液透析一周,每天换透析液体2次,透析完毕,分装于离心管后,-20℃保存。
2.根据权利要求1所述的一种黄酮类小分子黄芩苷完全抗原的制备方法,其特征在于:所述复合碳酸盐缓冲溶液的pH值为9-10、离子浓度为0.03-0.08mol/L、含载体蛋白为200-300mg/ml。
3.根据权利要求2所述的一种黄酮类小分子黄芩苷完全抗原的制备方法,其特征在于:所述载体蛋白为牛血清白蛋白n。
4.根据权利要求3所述的一种黄酮类小分子黄芩苷完全抗原的制备方法,其特征在于:所述牛血清白蛋白n是由下述制备方法制成:将牛血清白蛋白900-950mg,溶解于10000uL去离子水中,依次再加入40-45mg碳二亚酰胺和55-65mgEDC-HCL,室温下反应2小时,取10%乙二胺溶液100uL,缓慢滴加于上述牛血清白蛋白溶液中,用碳酸钠调节PH值到9-11,4℃反应10-20小时;将反应液装入透析袋,用pH值为7-8、离子浓度为0.01-0.03mol/L磷酸盐缓冲液透析一周,每天换透析液体3次,透析完毕,分装玻璃瓶,-20℃保存待用。
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