[发明专利]一种肌酐测定试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种肌酐测定试剂盒及其应用，属于生物检测技术领域。该试剂盒由试剂R1和试剂R2组成；试剂R1包括：肌酸酶、过氧化氢酶、肌氨酸氧化酶、4‑氨基安替比林、抑制剂和缓冲液；试剂R2包括：肌酐酶、过氧化物酶、显色剂、抗坏血酸氧化酶、抑制剂和缓冲液。该试剂盒采用肌氨酸氧化酶法来进行测定，具有线性范围宽、稳定性好等优点。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种肌酐测定试剂盒及其应用。

背景技术

肌酐是在肌肉中肌酸和磷酸肌酸代谢的最终产物，仅仅由肾小球排泄，不被肾小管重吸收，通常不与血浆蛋白结合。当肾脏机能受损时，肌酐的正常排泄受到阻碍，致使血清中肌酐含量增加。肾病在我国乃至世界上的发病率居于前10位。调查数据显示，我国隐形肾病患者约占人口的25％，因此肌酐水平的测定对肾脏疾病具有重要的临床意义。

肌酐作为小分子蛋白代谢产物，在人体血清中含量极低，且与其母体化合物肌酸共存，二者在一定条件下可相互转化。肌酐测定的主要方法有同位素稀释质谱法、高效液相层析法、化学测定法(碱性苦味酸法)、酶法等。其中，同位素稀释质谱法通过向样品溶液中加入一种同位素标记物作为内标物，在溶质与标记物溶液充分平衡后，对样品进行预处理，利用GC或LC-MS测定标记物与溶质的峰强度比来测定溶质的浓度，具有特异性高、准确度高等特点，但质谱价格昂贵、操作不便；高效液相层析法利用三氯乙酸、阳离子交换柱等对样品进行前处理，操作较复杂，不适用于大批量的临床标本分析；碱性苦味酸法成本低廉，操作简便，但一些“假肌酐”(如胍基乙酸内酰胺(glycocyamidine)、5-甲基胍基乙酸内酰胺)等干扰物质可导致肌酐测定结果偏高。

近年来，临床上常使用酶法进行肌酐含量的测定，酶法测定肌酐主要是利用肌酐酶催化肌酐水解生成肌酸，生成的肌酸在多种酶的系列作用下产生酚类物质，通过测色法即可确定肌酐含量。但酶法测定肌酐含量时，其主要干扰物为样品中的肌酸，为去除肌酸的干扰，现有试剂盒多采用双试剂法。比如，中国专利CN104459164B公开的一种血清肌酐检测试剂涉及双试剂法，利用γ-Fe2O3纳米粒子充分消除了内源肌酸的污染。

但现有技术旨在消除内源性肌酸及其他物质的干扰，忽视了临床对肌酐含量测定的范围的需要，当样本肌酐含量较高时，通常需要稀释样本才能测定，操作不便。比如，中国专利CN106198509B公开了用于测定肌酐的试剂盒和方法，该试剂盒能抵抗羟苯磺酸钙和酚磺乙胺对肌酐检测的负干扰，但是肌酐含量的线性检测范围仅在2000μmol/L以下，对于高肌酐含量的样品无法进行准确测定。

另外，此类酶法试剂盒中添加多种酶类，如肌酸酶、过氧化氢酶、肌酐酶，这些酶的稳定直接影响到试剂盒的保存时间。比如，中国专利CN102721684B公开了血清中肌酐的二步酶法测定方法及测定试剂，该试剂盒通过添加多种表面活性剂以规避过氧化物酶造成本底过高的问题，但是大量表面活性剂的使用易造成试剂盒稳定性差的情况。

因此，急需开发一种具有较宽线性范围、稳定性好的的肌酐含量检测试剂盒。

发明内容

针对现有技术在肌酐含量测定过程中存在的线性范围窄、稳定性差的缺陷，本发明提供了一种肌酐测定试剂盒，该试剂盒准确性好、特异性高、稳定性好且具有较宽的线性范围的，适用于临床全白动或半自动生化分析。

为了实现上述技术效果，本发明采用如下技术方案实现：

一方面，本发明提供了一种肌酐测定试剂盒，所述的试剂盒包括试剂R1和试剂R2；

所述的试剂R1包括：肌酸酶、过氧化氢酶、肌氨酸氧化酶、4-氨基安替比林、抑制剂和缓冲液；

所述的试剂R2包括：肌酐酶、过氧化物酶、显色剂、抗坏血酸氧化酶、抑制剂和缓冲液。

所述的试剂R1和试剂R2还包括酵母提取物。